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动物实验:大鼠血管平滑肌细胞培养步骤

2021-10-15 02:52:02
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  血管平滑肌细胞是许多重大动脉疾病的细胞底物。血管平滑肌细胞的不断增长是损伤性血管病变形成、动脉疾病发展的重要原因。体外培养血管平滑肌细胞是研究在血管病变发生过程中细胞及分子改变的基础。此外平滑肌细胞具有产生结缔组织和基质的功能,因此动脉平滑肌细胞是研究动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄以及高血压等疾病发病机制和防治工作的重要对象。本文以大鼠主动脉为材料,介绍如何培养大鼠血管平滑肌细胞,供正在做这类实验的科研朋友参考!

  大鼠血管平滑肌细胞培养步骤如下:

  1、颈椎脱臼处死大鼠,75%酒精浸泡 3~5min,无菌条件下打开胸腔,将大鼠左肺向右侧翻转,可见贴于脊柱右侧胸主动脉走行。上端沿主动脉弓,下端至膈的主动脉裂孔处,完整剪取胸主动脉,置于预先装有PBS的无菌培养皿中;

  2、用镊子轻轻剥离血管外结缔姐织,移至另一装有PBS的无菌培养皿;

  3、用眼科剪沿纵轴剪开血管条,无菌镊轻轻刮除内膜,移至另一无菌培养皿;

  4、用镊子钝性加压刮中膜2次,待出现裂口后夹住中膜将其取下;

  5、将取下的中膜加入含 20%FBS 的 DMEM 培养液,用眼科剪剪碎血管条,使组织块大小约1mm×1mm×lmm;

  6、用无菌滴管将组织块吸入细胞培养瓶,均匀铺于瓶壁,间距约 0.2~0.5cm;

  7、将培养瓶直立放置于 37℃/5%CO2细胞培养箱;

  8、1h 后轻轻放平,37℃/5%CO2细胞培养箱中绝对静置 3d;

  9、此后每 3d 换液 1 次;

  10、培养出来的 VSMC 及时传代及冻存于液氮,3~8代用于后续实验。

  大鼠血管平滑肌细胞培养注意事项:

  1、SD大鼠最好150-180g的,太小了血管太细,不好操作,太大则外膜脂肪太多剥不干净,容易成纤维细胞污染;

  2、在保证不污染准确操作的前提下尽可能的快,细胞活性好,容易成活;

  3、剪块时不要剪的太碎,太碎了组织损伤太大,细胞也不容易爬出;

  4、取中膜时坚持宁缺勿滥的原则,一旦有外膜混入,前功尽弃,所以千万不要贪多。

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