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细胞转染操作详细步骤

转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法

影响PCR体系蒸发的三个因素，传统解决蒸发问题的办法

提及PCR实验，是否出现过这样的问题？假阳性非特异性扩增数据重复性差假阴性拖尾无扩增产物样本降解其实，造成这些结果的原因有很多，例如引物质量不佳、模板质量不好、退火温度不合适等，但还有一个不容忽视的问题——PCR 体系蒸发。聚合酶链式反应（PCR）需要依赖 PCR 仪对各反应

细胞冻存与复苏步骤原理与注意事项

1949 年至 1960 年这一段时间可以称为冷冻保存的“甘油时期"，这一时期对生物材料的冷冻保存一般都是以甘油作为保护剂。Lovelock（1959）等人发现了一种新的化学保护剂，这就是人们熟悉的二甲基亚砜（DMSO）。而且，用于冷冻保存的仪器也有明显的发展。目前，无论是冷冻保存理论、各种保护剂、冷冻用品和设备以及

蛋白纯化方法原理（Western blotting实验）

能从成千上万种蛋白质混合物中纯化出一种蛋白质的原因，是不同的蛋白质在它们的许多物理、化学和生物学性质有着极大的不同，这些性质是由于蛋白质的氨基酸的序列和数目不同造成的，连接在多肽主链上氨基酸残基可是荷正电的、荷负电的、极性的或非极性的、亲水的或疏水的，此外多肽可折叠成非常确定的二级结构(α螺旋、β

蛋白提取步骤，13种蛋白提取方法

单层贴壁细胞总蛋白的提取：1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液2、每瓶细胞加3ml4℃预冷的PBS。平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。3、按1ml裂解液加10ulPMSF(100mM),摇匀置于冰上。4、每瓶细

蛋白抽提实验基本操作步骤

蛋白抽提实验基本操作步骤1、蛋白抽提实验介绍蛋白质的抽提实验是进行蛋白质实验分析的基本操作，可用于（1）蛋白质的分离（2）蛋白质功能结构检测（3）蛋白质表达前的基本操作。蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物

影响培养基灭菌效果因素有哪些

培养基灭菌是否彻底，影响因素很多，除了培养基内杂菌的种类和数量，灭菌温度的高低，时间长短外，还取决于：影响培养基灭菌效果因素有哪些1. 营养成分的保持湿热灭菌时，微生物被杀死的同时，培养基的营养成分也遭到了一定的破坏，特别是氨基酸和维生素。如在121℃，仅20min，就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱

有关细胞染色体核型分析

染色体核型分析染色体是细胞分裂期高度凝集的 DNA 蛋白质纤维，是间期染色质结构紧密盘绕折叠的结果。核型是指一个体细胞内的全部染色体按其大小、形态特征排列起来构成的图像。将待检细胞进行染色体数目、形态结构分析，确定其核型是否与正常核型一致，称为核型分析。染色体核型分析，是遗传学科学研究和辅助临床

细胞冷解冻过程中常见问题及细节（应该注意哪些细节来增加细胞的存活率）

细胞回收率除了与解冻细胞过程有关，也与冷冻过程以及使用之抗冻液有很大的关系。细胞在冷冻过程中会遭受许多压力，包含渗透压、自由基、休眠代谢等，导致多数细胞在冷冻或解冻过程中死亡，敏感的干细胞更是难以存活。除了这些压力之外，在操作过程中的细节亦可能成为回收率不佳的杀手。在冷冻及解冻的过程中应该注意哪

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