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实验外包:细胞划痕实验技巧分享!

发布时间:2021-08-26 02:26:35 阅读:15092次 来源:本站

  细胞划痕实验准备?材料仅仅需要6孔板,marker笔,直尺,20微升枪头(灭菌),PBS,和无血清培养基。怎么样?简单吧?

  准备工作:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)

  流程也非常简单:

  1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5到1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

  2、在孔中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。

  3、第二天用枪头比着直尺,尽量垂直于背后的横线划痕,枪头要垂直,不要倾斜。

  4、用PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基。

  5、放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样,拍照。

  下面是一系列经典的被伤害了的细胞照片:

  0h

6h

12h

24h

  大家看到没有,细胞被伤害之后,慢慢地长起来。这个时候,长起来慢是正常的,因为是要覆盖划痕后空出来的部分。我们也正是通过这种方法来检测细胞运动的方式。如果是肿瘤细胞的话,可以用这个实验来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。

  细胞划痕实验看上去简单,其实还是有些小细节需要注意的:

  在上述实验步骤第3划痕之前,是不用倒培养基的。划痕后再倒掉培养基加PBS清洗后,加无血清培养基。细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。因此是整个培养皿都加培养基的,观察部位是划痕而已。

  为什么要使用无血清培养基?答案是:成分明确,避免血清的成分不稳定。不象血清里面这么多乱七八糟的动作。

  那么,细胞划痕实验加的无血清培养基里含有生长因子吗?答案是加。因为主要检验的是细胞的转移能力,所以还是需要这些东西滴。

  有些科研学术者在做第4步的时候,用PBS冲洗的时候。一下子就把细胞冲散啦。这个很可能是由于细胞本身贴壁不牢,还没等消化,就被PBS冲散啦。贴壁细胞贴壁不牢证明状态非常不好,可能是污染导致,建议不要用于下一步实验。重新复苏吧。这里也有个小窍门,用1ml枪沿6孔板壁成45度打进PBS,避免简单粗暴。

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