Cas蛋白起催化作用，可以将新的外源DNA片段靶向插入CRISPR盒。然而，根据可特异性识别的编码序列的不同，Cas蛋白也分为多种。下面我们就结合图文一起来搞清楚Cas9/Cas12a/Cas12b/Cas13a/Cas13b/Cas14到底有哪些异同点吧！

1. Cas9

作用机制：Cas9蛋白能够和gRNA结合，诱导特定基因组靶序列处的双链断裂；还能在RNA的引导下，特异性地识别和切割DNA。其切割能力主要依赖于HNH和RuvC结构域。

结构形态：分子量约为160kDa，由1368个氨基酸组成。其结构包括核裁切结构域和SgRNA结合结构域。

具体应用：常用于基因治疗、分子诊断、抗体生产等领域。

2. Cas12a蛋白

作用机制：Cas12a作为一种2类核酸酶，可在crRNA的引导下找到PAM序列为TTTN的靶标位点，通过crRNA与靶标链的互补配对，实现对靶标双链DNA的特异性结合，再通过RuvC亚基切割双链DNA产生黏性末端，最后通过体内的DNA修复途径完成DNA的插入和删除等，从而进行gene编辑。

结构形态：分子量约为135kDa，是一种双端核酸酶，被包括在类似于髭毛状的结构中

结构可细分为REC和NUC叶，其中NUC叶缺少HNH结构域，但含有RuvC结构域。

具体应用：常用于基因编辑。

3. Cas12b蛋白

作用机制：与Cas12a不同，Cas12b蛋白需要crRNA和tracrRNA组合为SgRNA，在SgRNA的引导下特异性识别靶标单链DNA（SSDNA）或带PAM（TTN）序列靶标双链DNA（dSDNA），并对靶序列进行特异性切割，使dsDNA断裂并生成粘性末端。

结构形态：是一个多功能蛋白，包含RNA结合域、核酸酶域和DNA结合域。

具体应用：常用于DNA高灵敏度检测、基因编辑、转基因等研究领域。

4. Cas13a蛋白

 作用机制：是RNA介导的内切核酸酶，在靶标RNA存在PFS序列的情况下，在单链向导crRNA引导下与靶RNA特定位点结合并切割。Cas13a识别并切割靶标RNA的同时，释放出强大的非特异性单链RNA反式切割活性，可高效切割体系中任意单链RNA。

结构形态：分子量约为140KDa，主要包含两个HEPN结构域。

具体应用：常用于基因特定转录本、非编码RNA、RNA碱基修饰等研究。

5. Cas13b蛋白

作用机制：Cas13b蛋白与成熟crRNA相关。CRISPR/Cas13b复合物搜索目标SSRNA后，在原间隔区fanking位点（PFS）的帮助下诱导SSRNA目标处的构象变化位点，将RNA定位于5’端，将PAM序列（NAN/NNA）定位于3’端，从而切割非特异性RNA。

结构形态：分子量约为140KDa，主要包含两个HEPN结构域。

具体应用：常用于基因编辑和诊断领域。

6. Cas14蛋白

作用机制：Cas14是一种内切核酸酶，能够在tracrRNA：CrRNA（或SgRNA）的引导下，特异结合并切割靶标SSDNA，并且不需要PAM位点。

结构形态：分子量约40~70KDa。Cas14有24个变异基因，可分为三个亚组（Cas14a~c）。且这些变异都存在预测的RuVC核酸酶结构域。

具体应用：常用于靶标核酸的分子检测。