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动物实验:动物实验中缺血再灌注肾损伤动物模型

2021-09-05 03:30:01
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  (1)复制方法

  用体重为200~220g的雄性Wistar大鼠,经腹腔按戊巴比妥钠30mg/kg体重的剂量注射麻醉后,动物仰卧固定于手术板上。动物腹部术区常规消毒与去毛,在下腹部作一约2cm切口,进腹后分离左肾动脉,用无损伤微动脉夹夹闭左肾动脉60min后恢复灌注,同时切除右肾,分别按不同灌注时间(1, 3, 6, 24h)再分为4组。治疗组为再灌注前5min静脉注射,另设假手术组(不阻断肾血流)作为对照,分别按相应时间点采血和取肾。全自动生化分析仪测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平。肾组织常规石蜡切片HE染色,光镜下观察肾组织病理学改变。

  (2)模型特点

  缺血再灌注(ischemia-reperfusion, IR)后,大鼠肾组织中P选择素明显表达,且MDA含量增加和 SOD活性下降,出现明显的细胞凋亡及组织学病理改变。再灌注24h,实验组血清BUN与Cr明显高于假手术组;再灌注1h后,肉眼可见实验组肾皮质较苍白,肾髓质瘀血色深暗,光镜下肾小管上皮细胞肿胀,出现不同程度变性和坏死,间质充血水肿及炎细胞浸润。大鼠肾血流被阻断恢复灌流后肾功能减退,肾组织发生了显著的病理改变,肾小管上皮细胞明显肿胀,不同程度地出现变性和坏死,肾间质充血水肿并伴有炎症细胞浸润。缺血再灌注后可造成肾内氧自由基大量产生,内源性抗氧化物消耗以至清除氧自由基能力明显下降,加重了肾脏损伤。此外大量氧自由基生成,可使细胞DNA变性,蛋白质氧化,脂质过氧化甚至导致细胞死亡,推测这可能也是缺血再灌注时诱导细胞凋亡的一个因素。

  (3)比较医学

  缺血再灌注损伤在临床上十分常见,但其病理损伤机制仍不甚清楚。近年认为,黏附分子及其介导的白细胞与内皮细胞黏附作用,是缺血再灌注损伤的关键因素。阻抑黏附分子介导的中性粒细胞浸润、聚集,已证明可防止或改善由缺血再灌注引起的器官损伤。缺血再灌注肾损伤动物模型也可用成年日本大耳白兔,雌雄不拘,体重2~3kg。经耳缘静脉1%戊巴比妥钠2.5ml/kg体重的剂量注射麻醉兔,无菌手术开腹,去除左肾,右肾动脉夹闭1h,去夹恢复血液再灌流。术后48h击昏动物,下腔静脉取血,苦味酸比色法测血清Cr含量。缺血再灌注肾损伤动物模型也可用自体全血灌注的离体猪肾,供肾小型猪体重50~80kg。供肾猪均电击制动。对照组开腹后,即取肾下极少许置入冰盒中,以作检测用。缺血组肾缺血50min后即取肾皮质,检测同对照组。实验组采用离体猪肾缺血再灌注损伤模型,于再灌注0h(对照灌注血)、0.5h、1.5h、2.5h时各取血浆,测 LDH酶活力;再灌注2.5h时取肾皮质,所作检测同对照组。

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