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细胞实验怎么提高THP-1转染效率

2023-07-17 10:36:58
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  THP-1细胞因其特性,本身就很难转染,所以转染效率普遍偏低。但转染效率太低容易影响后续实验的进行,那么我们可以如何提高转染效率呢?

  目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。

  ● 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大,细胞死亡率较高;

  腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大;

  慢病毒转染细胞毒性低,但其病毒产量低,实验消耗病毒量大。

  三种方法各有优劣,可根据实验需求选择合适的转染方法。

  在开始转染前,很多老师会困惑,THP-1究竟先诱导为巨噬细胞再转染还是先转染再诱导呢?

  其实,这两种方法都是可以的,主要根据实验目的来选择。不过THP-1诱导为巨噬细胞后,不能继续传代增殖,所以如果需要大量细胞时,最好提前大量接种,然后再进行转染

  但需要注意的是,无论采用哪种转染方法都会引起部分细胞死亡,因此培养时需要时刻注意THP-1细胞状态,诱导或转染时,最好使用处于对数生长期的细胞

  不论选择哪种方法,在进行转染实验时,我们都需要根据实际情况优化实验条件。影响转染效率的因素很多,从细胞培养条件和细胞生长状态,到转染方法的操作细节,都需要考虑。以下注意事项可为大家在实验遇到难题时,快速进行问题排查:

  1. 转染效率受转染质粒本身效果影响。瞬时转染宜使用超螺旋DNA;在稳定转染中,细胞对线性DNA的摄取水平低于超螺旋DNA,但它将DNA整合至宿主基因组中的效果更好;

  2. 一般培养基中加入血清会促进DNA的转染。但脂质体转染和转染RNA时,最好在无血清的情况下进行;

  3. 在转染之前更换培养基,可提高转染效率,所用培养基可37℃预温;

  4. 脂质体/ DNA混合物应当逐滴加入,尽可能保持一致,从培养皿一边到另一边,边加入边轻摇培养皿,以确保均匀分布和避免局部高浓度,严格控制时间;

  5. 抗生素也会影响转染效率,特别是使用脂质体试剂时,会引起细胞毒性从而使转染效率降低。若接种时未添加抗生素,则转染前可不用更换培养基

  6. 对于不同的细胞培养板,脂质体核酸转染试剂、DNA、细胞和培养基的使用量会有所不同。

  参考文献

  [1] 颜文杰, 孙文逵, 李培,等. 三种不同方法转染THP-1巨噬细胞效果比较[J]. 中华肺部疾病杂志:电子版, 2015, 8(1):5.


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