细胞培养中的支原体污染怎样处理？

2023-05-09 10:20:03

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　　用扫描电镜方法简便快速

　　①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上腔灶，24h后取出，用相差油镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。

　　②荧光染色法：荧光染色用能与dna特异性结合的荧光染料hoechst

　　33258，可使支原体内含有的dna着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的hanks液漂洗一下，用l：

　　3醋酸甲酵固定10min，然后用生理盐水漂洗．置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的hoechst

　　33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min．向细胞面滴加ph5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。

　　③电镜检查；用扫描电伍誉扮镜方法简便快速．也可以利用透射电镜。

　　④dna分子条文检查或支原体培养等方法：检出虚模率高．但方法较为复杂