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悬浮细胞传代的操作步骤(悬浮细胞怎么传代)

2023-05-01 10:35:45
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  对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

  1.收到细胞后,次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

  2.悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完,全培养基)。

  3.换液可通过添加几毫升新鲜培养基或离心之后去上清液,添加新培养基重悬培养。

  细胞传代的操作步骤

  1.先,重要的是要清楚细胞需要监测的频繁程度,这取决于该细胞的扩增速度。

  2.现在培养液为亮橙色,再观察其它生长情况。如培养液是否浑浊-如浑浊则可能有污染,细胞的大小和密度以及细胞的总体质量。

  3.如果细胞密度达到90%,吸去细胞培养液,用无钙离子和镁离子的磷酸缓冲液洗涤。

  4.然后加入胰酶,置于37摄氏度约5分钟,确认细胞脱壁后,加入新鲜细胞培养液终止胰酶的水解。

  5.将悬浮的细胞转移到锥形管离心。细胞离心下来后,小心弃去上清,重悬细胞于新鲜培养液。计数收集到的细胞然后根据合适密度接种细胞立即进行扩增或用于将来扩增。

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