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影响细胞转染实验转染因素有哪些

2023-03-27 10:37:34
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  影响细胞转染实验转染因素 :

  1、血清

  血清影响复合物的形成,降低转染效率

  阳离子脂质体和 DNA 的*佳量在使用血清时会有所不同,因此想在转染培养基中加入血清时要进行条件优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康,对于对血清缺乏比较敏感的细胞,可以使用 OPTI-MEM I 培养基。对于对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞,建议使用 LIPOFECTAMINE 2000。

  2、抗生su

  比如青霉素和链霉素,是影响转染的培养基添加物。这些抗生su一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使抗生su可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。

  3、细胞代数

  转染前细胞*好经过 1-2 次传代保证细胞生长旺盛容易转染,注意贴壁细胞一旦长满就不好转染。

  4、细胞铺板密度

  一般转染时,贴壁细胞密度为 70%-90%,悬浮细胞密度为 2*10^6--4*10^6 细胞/ml 时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。

  5、DNA 质量

  DNA 质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术基于电荷吸引原理,如果 DNA 不纯,如带少量的盐离子,蛋白,代谢物污染都会显着影响转染复合物的有效形成和转染的进行。

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