资讯动态

细胞实验原理及操作步骤过程

2023-03-26 10:30:45
|
访问量:14462

  细胞实验原理:

  在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

  细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞zui易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大

  目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。

  细胞操作步骤过程:

  1.  细胞实验室进行常规消du,紫外照射40min以上。

  2.  培养液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱370C预热20min,备用。

  3.  二甲基亚砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min,备用。

  4.  从液氮保存罐中取出冻存管,立即放入400C水浴中,快速摇晃,直至冻存液完全融化。

  5.  将细胞悬液移入15ml离心管,缓慢加入4ml培养液,离心(1000r/min,5min)。

  6.  用培养液悬液混悬沉淀细胞,调整细胞浓度,方培养箱中培养。

  7.  记录复苏日期。

  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言×