细胞实验原理：

　　在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

　　细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞zui易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大

　　目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。

　　细胞操作步骤过程：

　　1.  细胞实验室进行常规消du，紫外照射40min以上。

　　2.  培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱370C预热20min，备用。

　　3.  二甲基亚砜（DMSO）在40C冰箱中冷藏30min，备用。

　　4.  从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。

　　5.  将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。

　　6.  用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。

　　7.  记录复苏日期。