低至45元!病理染色【夏日盛惠】活动正在进行中
资讯动态

细胞周期检测步骤

2023-03-22 10:26:41
|
访问量:16042

  由于细胞周期各时相的 DNA 含量不同,通常正常细胞的 G1 / G0 期具有二倍体细胞的 DNA 含量 ( 2N ),而 G2 / M 期具有四倍体细胞的 DNA 含量 (4N),而 S 期的 DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。

  PI (propidium iodide),碘化丙啶,是一种核酸染料可以与 DNA 结合,其荧光强度直接反映了细胞内 DNA含量。因此,通过流式细胞仪 PI 染色法对细胞内 DNA 含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为 G1 / G0 期,S 期和 G2 / M期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。

  检测步骤

  1、收集样品

  以贴壁细胞为例,吸走原有培养基至离心管中(不要丢弃备用),用PBS洗细胞2次,加入胰酶进行消化,再使用原有培养基终止消化后,转移至离心管中,1500rpm 离心 5min 沉淀细胞,弃上清。

  2、PBS 洗

  加入 1ml 4℃预冷的 PBS 重悬细胞沉淀, 1500rpm 离心 5min,弃上清,以充分去除残留的 FBS 和胰酶,可重复2次。

  3、细胞固定

  加入 1ml -20℃预冷的 70%乙醇重悬细胞沉淀(加乙醇时应注意边加入边轻柔吹起细胞,放置固定时细胞结成团,难以吹散而影响后续的检测),4℃固定 30min 或 -20 ℃固定过夜后, 1500rpm 离心 5min,弃上清,去除残留的乙醇。

  4、PBS 洗

  去除乙醇后,加入 1ml 预冷的 PBS 重悬细胞沉淀, 1500rpm 离心 5min,弃上清,可残留一些PBS 避免细胞被吸走。

  5、染色

  按照不同试剂盒的要求加入配置好的PI染色液,在相应的条件下进行避光孵育,一般需要30min,之后进行上机检测,如果不能立即上机检测,可以4 ℃ 冰箱保存待测,最好在5h之内或者当天之内完成检测。

  6、流式检测分析

  用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光(PI通道),以低速获取细胞,低速可保证细胞之间的差异尽可能的小, 保证更高的精确度。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析。


  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言(即刻联系为您提供专业的解决方案) ×
留言咨询

病理染色【夏日盛惠】活动正在进行中,点击查看活动详情。

欢迎前来咨询~