荧光定量PCR原理

　　荧光定量PCR技术，是指在普通PCR技术的基础上，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。主要有两种方法：

　　1、染料法：SYBR Green 染料

　　在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

　　2、TaqMan探针法：

　　探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

　　Ct值

　　1、Ct值含义

　　Ct值(Cycle threshold，循环阈值)的含义为:每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。

　　2、Ct值与初始模板的关系

　　固定循环数后，荧光型号与模板数成正比；

　　初始DNA量越多，荧光达到阈值时所需要的循环数（Ct值）越少；

　　初始模板的对数浓度与Ct值呈线性关系，根据样品的Ct值就可计算出样品中所含的模板量。

　　优势与应用

　　可完成快速多重检测；

　　操作时间短，大通量；

　　定量：确定发病标准；

　　数据化，可对比分析；

　　鉴别诊断，区分野毒；

　　疫苗质量含量的评价；

　　动保产品的临床评估。