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制作培养基主要步骤

2023-01-14 10:32:50
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  在生物制药过程中,细胞培养基发挥着重要作用。为满足生物产品的生产需求,必须支持高密度细胞的生存,促进生物产品的合成和细胞外运输。简单制作培养基,需要完成以下几个主要步骤:

  1. 简单制作培养基,需要选择培养基配方

  同一种培养基,其表达方式往往存在着差异。所以,除了应当严格按照标准方法的规定编制之外,我们一般应尽可能收集有关数据,加以比较和核对,然后根据自己的目的选择和记录数据来源

  2. 简单制作培养基,需记录培养基的制备

  培养基的制备记录包括培养基的名称、配方及其来源、pH值、灭菌温度、时间、配制日期、制备人等,并且要复印记录和保存原始记录备查。对副本的记录应该和培养基一起保存,以防出现混乱。

  3. 简单制作培养基,需称重培养基的成分

  培养基成分要准确称量,并注意防止混淆。每一种成分称量完毕后,都要在分装的一面打上记号,然后将分装的药物一起放在左边。每一个成分称量完之后,都会向右移动。全部称量完毕,应再次检查

  4. 简单制作培养基,需调整培养基成分

  介质中使用的化学物质应该是化学纯品,铜锅或铁锅易导致铜、铁混入培养基,使细菌难以繁殖。用不锈钢锅加热溶解较为适宜。溶解于水的锅子,可用温水加热,随时搅拌,防止结焦。若发现结焦,则不能使用介质,需重新调配。在溶解大多数固体成分之后,用少量热将其全部溶解,直到沸腾。

  5. 简单制作培养基,需调整培养基的pH值

  由于加热消毒过程中培养基的 pH值会发生变化,因此应在培养基组分完全溶解后,调整 pH值。举例来说,牛肉汁的 pH值下降了0.2左右,而肠浸出物的 pH值则明显上升。所以,在这一步中,操作者要注重不断探索经验,掌握培养基的最终 pH值,保证培养基的质量。在调整 pH值后,要将其煮沸几分钟,以利于培养基沉淀。

  6.简单制作培养基,必须将其过滤并澄清

  液体介质必须完全澄清,普通液体介质可用滤纸过滤,滤纸应折成折扇状或漏斗状,以免滤纸因水力不均而破裂。

  当温度较高时,培养基可以用干净的白天鹅绒过滤。新制肉、肝、血、马铃薯等滤液,必须用丝绒布过滤,再用滤纸一次又一次地过滤。若过滤方法不能满足澄清的要求,则应采用蛋清过滤。

  7. 简单制作培养基,需要对介质分类处理

  按培养基及试管内其它烧瓶使用的容器、用途分为适当。货运量超过每2个集装箱3个容量包装的要求。封堵也是容器外包,可用防水防潮纸塞纸封堵容器内面。电动式装配机采用定量最好的重用或半自动解。预处理和预处理对灭菌容器的清洗要干燥,灭菌时要彻底,培养基要干燥。一只小玻璃瓶批培养基被检测出,培养基被最后一批 pH批作为该值基准时,应被分成20 mL的培养基进行消毒处理。

  8. 简单制作培养基,需要对其进行消毒处理

  普通介质使用121℃高压蒸汽灭菌15分钟。本发明适用于各种介质的制备,如无特殊要求,可用于灭菌。一些热成分,如碳水化合物,应该单独制备20%或更多的浓缩液,过滤或间断杀菌,然后通过无菌操作技术加入到培养液中。在低温下,明胶培养基也能杀菌。血、体液及抗菌素应经无菌处理后,加至约50℃冷却培养基中。

  9. 简单制作培养基,需要对培养基的质量进行检测。

  每次处理完培养基,都要仔细检查,如破损、浸渍、颜色异常、棉塞污染等,要进行筛选和弃置,最后才能确定 pH值。培养基培养一晚,若有细菌生长,培养基将被丢弃。常规菌株接种1×2管或瓶培养基,24 h培养,对生长不良或无菌的菌株进行培养,追踪其产生原因,并反复接种。如不发生变化,应丢弃培养基,禁止使用。

  10. 简单制作培养基,需对培养基简易制备及保藏

  培养液应储存在低温阴暗处,最好保存在普通冰箱。在培养液中放置一个星期后,培养液不能超过三天。每个培养基必须附有培养基准备记录的一份复印件或清晰的标签。


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