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提高磷酸钙转染的效率方法

2022-12-24 10:35:43
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  提高磷酸钙转染法效率的共通步骤,目的都是为了避免产生会被细胞内吞、加工失效的大颗粒沉淀。

  提高转染效率的操作有以下这些:

  1、将小分子DNA整合在高分子质量基因组DNA上,以大分子作为运载体,能提高转染效率。

  2、测试缓冲液适合的ph,可制备几批pH范围为6.90~7.15的HEPES盐缓冲液,分别测试缓冲效率,找到最适pH值。

  3、使用转染促进剂,如甘油、氯喹、其他可购买的转染促进剂。因为这些试剂对细胞有一定毒性,因此,应针对每种细胞系通过实验确定转染促进剂处理的最佳时机、时长和强度。

  除了这些共通的步骤,不同厂家还会对混匀DNA和磷酸钙的速度有要求。有些方法要求只能轻轻搅动,有些建议用移液器温和吹吸混匀,有些则提倡应缓慢混合。

  因此,在使用磷酸钙转染时,应针对不同试剂和细胞系,耐心调整实验参数,才是获得高转染效率的关键。

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