共转化，筛选转染细胞的实用工具

2022-12-24 10:21:56

访问量：16262

　　想要达到转染的目的，即分析转染基因的功能和表达，需要转染的基因稳定整合进入宿主染色体。

　　根据细胞类型，细胞群体中，最高有80%的细胞，以瞬时表达的方式表达转染的基因。但对于稳定转染，好的情况，也只有1/1000的成功率——细胞能稳定表达转染的基因。

　　所以，我们需要通过筛选活的新表型（标记）的细胞，来分离稳定转染体。方法是将标记的基因和待转染的基因进行重组、连接，共同转染到细胞核内。这种物理上没有关联的基因整合成1个序列，并在同一转化细胞内表达的这种现象，叫做共转化。

　　那么，筛选具体是如何进行的呢？

　　一般情况下，这个标记是某种编码抗生素抗性的基因，和待转染基因一起在细胞上表达，如第一个在哺乳动物细胞上广泛使用的筛选基因，编码胸苷激酶（TK）的病毒基因。

　　待转染的细胞系，是不含TK的哺乳动物细胞系，在转染成功后，才会变成含TK的细胞系，才能在氨基嘌呤存在的培养基中生存。

　　因此，共转化是一个筛选细胞的实用方法。