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共转化,筛选转染细胞的实用工具

2022-12-24 10:21:56
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  想要达到转染的目的,即分析转染基因的功能和表达,需要转染的基因稳定整合进入宿主染色体。

  根据细胞类型,细胞群体中,最高有80%的细胞,以瞬时表达的方式表达转染的基因。但对于稳定转染,好的情况,也只有1/1000的成功率——细胞能稳定表达转染的基因。

  所以,我们需要通过筛选活的新表型(标记)的细胞,来分离稳定转染体。方法是将标记的基因和待转染的基因进行重组、连接,共同转染到细胞核内。这种物理上没有关联的基因整合成1个序列,并在同一转化细胞内表达的这种现象,叫做共转化。

  那么,筛选具体是如何进行的呢?

  一般情况下,这个标记是某种编码抗生素抗性的基因,和待转染基因一起在细胞上表达,如第一个在哺乳动物细胞上广泛使用的筛选基因,编码胸苷激酶(TK)的病毒基因。

  待转染的细胞系,是不含TK的哺乳动物细胞系,在转染成功后,才会变成含TK的细胞系,才能在氨基嘌呤存在的培养基中生存。

  因此,共转化是一个筛选细胞的实用方法。

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