染色质免疫共沉淀，又叫 Chip（Chromatin Immunoprecipitation）。Chip 又正好是英语里面薯片的意思。为了有趣，就叫薯片实验吧。做薯片做了几个月，时间不长，但深刻体会到了魔鬼都在细节中和细节决定成败。现在把值得注意的 15 个细节总结如下：

　　1、cell counting：尽量做到准确准确再准确，否则会影响 input 结果。

　　2、cross link：甲醛的终浓度是 1%，这个基本所有的 protocol 上都会强调。

　　3、resuspend cells with SDS:一定要选用小的 tip 头，在液面下吹打，否则很容易产生气泡，后面的 sonication 就麻烦了。

　　4、sonication：Chip 实验中最重要的一部分，合适的条件要自己摸索，可以一次尝试不同次数的 sonication，然后建议采用 EZ-ChIP 上推荐的方法看看 sonication 的效果如何。

　　5、加入 salmon sperm DNA/Protein A or G 之前要先混匀，因为 salmon sperm DNA 是很粘稠的物质，若不混匀，后面你会发现 beads 的量不一样，自然也会影响实验的结果。

　　6、wash 的时候前面几个步骤可以不用洗的太干净，但最后一个要尽量吸干净，必要时可用 gel loading tips 吸。

　　7、含 beads 的 samples 离心时，有的 protocol 上推荐是 1000rpm，45 秒，但可以根据情况调整，但要注意转速不能太快防止 beads 破碎。（当然如果采用的是 magnetic 的 beads 就不存在这个问题）

　　8、reverse crosslink 可以是 65°C 4 个小时，也可以 overnight。

　　9、reverse crosslink 后的在进行下面步骤之前建议先离心，把蒸发到离心管盖子上的部分离下来。

　　10、每次行 real time PCR 之前都要把 sample 离心保证取样的准确。

　　11、1~10ul 的枪取 3ul 以上才比较准确，所以考虑好自己 PCR 反应体系的配置。

　　12、一个 Chip 实验一般需要 3~4 天的时间。但是，其中有几个步骤是可以中途停下来的。毕竟，谁也没有办法不眠不休地连续 3、4 天一口气做完。下面是几个可以停下来喘口气的地方：

　　（1）细胞收集：用含蛋白酶抑制剂的 PBS 洗涤离心，去上清的细胞收集液可置-80°C 冻存；

　　（2）用 SDS 重悬细胞后可置-80°C 冻存；

　　（3）sonication 结束，离心后的上清置新的离心管后可-80°C 冻存；

　　（4）reverse cross-link 后的标本可-80°C 冻存。冻存后就可以该干啥干啥去了。想接着做的时候，拿出来解冻就可以啦。

　　13、agarose beads 的 wash 过程中以及后面的 DNA 提取过程中乙醇的 wash，可以用细胞室的那种吸引器，接上 200ul 的 tip 头吸，这样会节省很多时间（每个实验室情况可能不一样）。

　　14、DNA 提取后建议用水溶解 DNA，因为 TE buffer 里的 EDTA 可能会影响 PCR 反应体系中的 Mg2+。

　　15、溶解 DNA 的水量可以根据 PCR 反应体系的要求适当调整。

　　综上所述，我们探讨了做 Chip 实验需要注意的 15 个小细节。细节虽小，但是却很重要。需知魔鬼都是在细节中！