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大鼠气道平滑肌细胞培养方法

发布时间:2022-11-19 10:26:03 阅读:1282次 来源:百度学术

  大鼠气道平滑肌细胞分离自气管组织,气道平滑肌是气管的重要结构组成之一,在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。气道平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。气道平滑肌细胞的异常是呼吸道疾病的重要病理特征之一,其增生、肥大是气道重塑的关键。

图例

  特性[1]

  形态特性:成纤维细胞样

  生长特性:贴壁生长

  培养条件:DMEM(高糖)+10%FBS

  传代方法:1:3传代;2~3天1次。

  冻存条件:无血清细胞冻存液

  污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

  细胞培养 [1]

  复苏细胞:

  1. 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

  2. RASMCs大鼠气道平滑肌细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  传代方法:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

  3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

  4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

  细胞冻存:

  待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

  主要参考文献

  [1] 王宇 孙婧 金融 梁宜 刘艳艳 尹磊淼等; 针刺对哮喘大鼠气道重建模型气道平滑肌细胞T型钙通道蛋白表达的影响。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1793.html

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