一、  器械

　　显微器械：眼科剪一把，直弯眼科镊各一把，细结镊一把，手术刀一把，针头诺干

　　杀老鼠器械：手术剪一把，大镊子一把，弯眼科镊一把，组织钳一把，50ml烧杯一个（锡纸包好）

　　另外：10ml离心管两个，培养皿两个，10ml的瓶子三个，小滤器两个，硅胶板一块，培养瓶盖子诺干

　　二、试剂

　　D-HANKS液250ml，双抗2ml（青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml），一型胶原酶，木瓜酶，BSA。后三种加上D-HANKS配成1ml的消化液，终浓度皆为1mg/ml。无血清DMEM和含20％FBS的DMEM

　　三、步骤

　　1．  取大鼠，称重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉

　　2．  绑好大鼠，先剪开腹腔，剪断腹部大动脉放血，后剪开胸腔，取肺

　　3．  放入烧杯，后移入超净台，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作

　　4．  倒入已加双抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心脏

　　5．  用针头将肺固定在硅胶板上，硅胶板置于培养皿里

　　6．  用镊子将肺的内外膜除去，只剩下平滑肌

　　7．  用眼科剪将肺部剪成1－2mm的小碎块

　　8．  将碎块移入配好的消化液中，放入培养箱中，消化15min

　　9．  取出，加入无血清的DMEM，约10ml，移入离心管中

　　10．  980转/min，离心10min

　　11．  倒掉上清，加入约1ml含20％FBS的DMEM

　　12．  将碎块用滴管加入25ml的培养瓶里，液体不要加多，有种湿湿的感觉即可。一到两天可以再加点液体

　　13．  大概五到七天可以爬出