您的位置:首页>>公司动态>>行业资讯

动物实验:小鼠肝细胞原代培养实验方法原理

发布时间:2021-08-23 01:54:00 阅读:16202次 来源:本站

  小鼠肝细胞代培养实验方法原理

  将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。

  小鼠肝细胞原代培养实验材料

  小鼠

  试剂、试剂盒

  DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS

  仪器、耗材 饭盒纱布剪子镊子烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6孔培养板吸管移液管手套微量加样器

  小鼠肝细胞原代培养实验步骤

  一、实验材料准备

  1.动物:小鼠。

  2.试剂:DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS。

  3.器械:饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器。

  4.准备:酒精擦拭台面后把物品摆放好,开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。

  二、方法

  1.将小鼠断颈致死,置75%酒精泡2-3秒钟,取肝脏,置于盛有PBS的平皿中。

  2.剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物,转移到另一个盛有PBS液的平皿中。

  3.用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2),玻片研磨,转到离心管,离心(1 000 rpm,5 min)。

  4.视组织或细胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶,37℃中消化20分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。

  5.加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用。

  6.用100目孔径滤网滤过,除去未消化的大组织块。

  7.再次离心5 min,弃上清液。

  8.加入无血清培养液5 ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。

  9.加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量),血球计数板计数。

  注意事项:

  小鼠肝细胞原代培养在细胞培养过程中,从实验室的设计到实验过程中的操作,都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻,所以小鼠肝细胞无论从实验室的设计,还是使用的物品及细胞培养的操作过程,都要注意保持无菌环境。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/179.html

注释:[本文仅供阅读]不代表企业及作者的立场,如侵权请联系删除,欢迎分享本文,转载请保留出处!

推荐服务

  • 分子实验

    分子实验平台为广大科研工作提供蛋白、RNA和DNA分子类分析及检测服务···

  • 细胞实验

    细胞实验平台为广大科研工作者提供原代细胞提取、鉴定和培养相关服务···

  • 病理实验

    动物实验平台为广大科研工作者提供动物寄养、疾病模型构建和体内验证···

  • 动物实验

    动物实验平台为广大科研工作者提供科研成果向产品转化的服务,转化方···

  • 精准医疗

    精准医疗平台为癌症患者提供肿瘤移植动物体内服务,模拟患者癌症发展···