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细胞克隆形成实验原理

2022-11-14 10:34:45
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  实验原理

  克隆形成实验是肿瘤细胞学研究中的一种常用技术,其原理是将细胞分离成单细胞悬液,在培养基上接种培养,根据集落形成数量和大小来检测细胞增殖能力和致瘤性。该实验可用来研究肿瘤细胞的增殖能力、侵袭性,探讨细胞对不同杀伤因素的敏感性。

  应用简介

  软琼脂克隆形成实验可用于:

  ①细胞分化的基础研究;

  ②临床肿瘤治疗的疗效检验等方面。

  当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。

  平板细胞克隆适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞可用于:

  ①细胞增殖实验

  ②细胞群体依赖性检测

  常见问题

  1平板克隆实验

  1)实验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。

  2)细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度,否则结果的准确度会受到很大影响。

  3)一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强。

  软琼脂培养克隆形成试验

  1)软琼脂克隆的操作相对复杂,在实验过程中一定要注意无菌操作。

  2)在将琼脂于培养基混匀时,要注意琼脂温度,而且动作要迅速,避免局部结块。

  3)制备好底层琼脂后,要待其完全凝固后再浇上上层琼脂。

  4)通常下层1.2% Argrose快些铺,略有不平是没有太大关系的,上层0.7% Argrose与细胞混合时水浴不大于40度,小心均匀的铺,37度不会那么快凝固,孵箱里过几天就好了。

  5)软琼脂克隆形成试验方法简单,适用于不贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大,接种细胞的密度每平方厘米不超过35个,一般6cm的平皿接种1000个细胞。

  6)软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系,正常细胞在悬浮状态下不能增殖,不适用于软琼脂克隆形成试验。

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