实验原理

　　克隆形成实验是肿瘤细胞学研究中的一种常用技术，其原理是将细胞分离成单细胞悬液，在培养基上接种培养，根据集落形成数量和大小来检测细胞增殖能力和致瘤性。该实验可用来研究肿瘤细胞的增殖能力、侵袭性，探讨细胞对不同杀伤因素的敏感性。

　　应用简介

　　软琼脂克隆形成实验可用于：

　　①细胞分化的基础研究；

　　②临床肿瘤治疗的疗效检验等方面。

　　当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。

　　平板细胞克隆适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞可用于：

　　①细胞增殖实验

　　②细胞群体依赖性检测

　　常见问题

　　1平板克隆实验

　　1）实验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

　　2）细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响。

　　3）一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

　　软琼脂培养克隆形成试验

　　1）软琼脂克隆的操作相对复杂，在实验过程中一定要注意无菌操作。

　　2）在将琼脂于培养基混匀时，要注意琼脂温度，而且动作要迅速，避免局部结块。

　　3）制备好底层琼脂后，要待其完全凝固后再浇上上层琼脂。

　　4）通常下层1.2% Argrose快些铺，略有不平是没有太大关系的，上层0.7% Argrose与细胞混合时水浴不大于40度，小心均匀的铺，37度不会那么快凝固，孵箱里过几天就好了。

　　5）软琼脂克隆形成试验方法简单，适用于不贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大，接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞。

　　6）软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系，正常细胞在悬浮状态下不能增殖，不适用于软琼脂克隆形成试验。