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提高电穿孔法转染的效率方法

2022-11-13 10:38:53
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  电穿孔法难点在于提高电穿孔的效率。实验操作者一般能从电转仪厂家得到转染的详细方案和优化指导。当你需要自己优化转染效率时,可以从以下方面进行:

  1、外加电场的强度:电压过低,细胞膜不能形成小孔,使得外源分子通过;电压过高,细胞会受到不可逆损伤,以至于裂解。对于大部分哺乳细胞来说,电压250~500V/cm是合适的。实验操作者需要查询资料,找到所需细胞系转染的合适电场强度。

  这部分的操作建议通过逐级增加电压来确定*佳转染电场强度。

  2、电脉冲时间的长短:一般电脉冲只进行1次。根据电转仪的具体参数设置,不同仪器间差异较大。

  3、温度:细胞在室温时电转染,瞬时表达水平*高;对于高强度电转,产生大量热量的实验来说,将细胞保持在0°C较好,但电转染后需要室温孵育一段时间。

  4、DNA:线性DNA比环形DNA的转染效率高,合适浓度是1~40μg/mL。使用质粒时,需要提高质粒的纯度。

  5、培养基:用缓冲盐溶液(HEPES盐缓冲液)悬浮细胞的转染效率较高,比使用含非离子物质(甘露糖、蔗糖)的缓冲液高数倍。

  6、细胞状态:最好使用生长活跃、状态健康、无污染、传代次数低的细胞进行转染。


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