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PCR实验的污染来源有哪些

2022-11-01 10:46:36
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  PCR实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。在实际实验过程中有哪些问题需要注意的,一起来看看吧~

一、PCR实验室的污染来源有哪些?

  1.样本间交叉感染:

  收集样本的容器被污染或样本密封不严导致外溢;不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖;移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散,相互交叉污染。

  2.实验试剂污染:

  主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中,因为PCR试剂对温度十分敏感,需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于0℃,但这个过程也充满污染风险。

  3.扩增产物污染:

  大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖,这是PCR反应中最主要、最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。

  4.克隆质粒污染:

  作为阳性质控品的克隆质粒外溢。

二、PCR实验室污染应急处理方法,小贴士!

  1、若核酸样本溢出:

  立即用布或纸巾覆盖,由外围向中心倾倒10%的次氯酸消毒剂,约30分钟后,清除污染物品,再用次氯酸消毒剂擦拭,并用75%酒精喷洒,移动紫外车定点照射1小时。

  2.其他不明情况污染:

  1、暂停所有实验操作;2、清理实验室内所有物品,寻找污染来源;3、加大实验室的通风;4、对实验室内所有表面(台面、地面及墙面) 进行消毒;5、75%酒精空中喷雾;6、开启紫外消毒装置,延长紫外照射时间(4小时以上);7、以上措施每日进行,直至污染消除;用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测,连续3次均阴性后方可进行常规检测。

  为了自己要高度重视这些「PCR实验室」内的职业危害,充满负压、噪音、病毒的PCR实验室到底有没有职业危害这个问题,小编还是决定要抛开专业说专业。

  负压实验室,是检测病毒样本的最基本条件。所谓负压,就是在实验室内气压比实验室外环境的正常气压要低,在实验室内外产生一定的压力差,从而控制气体流动的方向,保证气流从实验室外流向实验室内,负压能确保室内空气不会泄漏出去造成污染,可以有效的保护环境。

  但是负压实验室环境会不会对人体会造成伤害呢?搜遍现有的文献资料,所有论点都是强调对环境的安全性,对于在负压环境下的人有没有影响这个问题,并没有一篇文章提及,更别说进行科学详细的论述。

  但没提及的事情不等于不存在,或许这是从业人员面临的一种新型的职业危害,有些危害可能已经出现了,可有些危害一时还不易被工作人员察觉,但实际从事该工作的工作者应当给予重视。


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