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新生SD大鼠大脑皮质神经元的原代培养及鉴定解析

2022-10-19 10:31:16
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  摘要:

图例

  文题释义:

  微管相关蛋白:是细胞内存在的与微管结合的一种蛋白质,主要包括微管相关蛋白1、微管相关蛋白2、Tau和微管相关蛋白4等,前3种蛋白主要存在于神经元中,而微管相关蛋白4存在于各种细胞中。

  胶质纤维酸性蛋白:是一种中间丝蛋白,分子质量为56 kD,主要存在于中枢神经系统的星形胶质细胞内,可作为一种特异性标志物用于鉴定星形胶质细胞。

  背景:培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在,但培养方法一直没有统一的标准。

  目的:探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响。

  方法:选取新生24 h内的SD乳鼠,取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞,培养后24,48,72 h,用5 μmol/L或10 μmol/L阿糖胞苷处理48 h;另取全部大脑皮质细胞,培养后48 h用5 μmol/L阿糖胞苷处理48 h。培养至第7天,倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8法检测阿糖胞苷对神经元活性的影响,免疫荧光和Western blot检测神经元的纯度及成熟度。

  结果与结论:①倒置显微镜:10 μmol/L 阿糖胞苷24,48,72 h组神经元密度分别低于同时间下的5 μmol/L阿糖胞苷组,该6组神经元突起相互之间均可连接成紧密的网状结构,神经元胞体丰满并充满折光特性;全皮质组细胞密度低于正常对照组,并可明显观察到非神经元;②CCK-8检测:各阿糖胞苷组细胞活性均低于正常对照组(P < 0.001), 10 μmol/L 阿糖胞苷24,48,72 h组神经元活性低于同时间下的5 μmol/L阿糖胞苷组(P < 0.05),5 μmol/L 阿糖胞苷24 h组神经元活性低于 5 μmol/L 阿糖胞苷48,72 h组(P < 0.01);③免疫荧光染色:各阿糖胞苷组神经元纯度大于正常对照组、全部皮质组(P < 0.001),各阿糖胞苷组神经元纯度无差异;④Western blot检测神经元特异性烯醇化酶蛋白表达:各阿糖胞苷组神经元成熟度高于正常对照组(P < 0.05),其中以 5 μmol/L 阿糖胞苷48 h组成熟度最高;⑤结果表明:取新生24 h内大鼠大脑皮质表面2.0-3.0 mm处皮质,培养后48 h加入5 μmol/L 阿糖胞苷处理得到的神经元活性、成熟度和纯度较好。

  https://orcid.org/0000-0003-2938-2738(王京)

  中国组织工程研究杂志出版内容重点:干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程

  关键词: 阿糖胞苷, 大脑皮质, 神经元, 原代培养, 神经元活性, 大鼠

  引用本文: 王 京, 卢思彤, 吴印林, 刘玉东, 邹维艳, 孙美群. 新生SD大鼠大脑皮质神经元的原代培养及鉴定[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(15): 2344-2349.


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