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免疫沉淀抗体选择技巧

2022-10-09 10:34:38
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  免疫沉淀实验中需要用到捕获抗体(IP)、检测抗体以及二抗(WB),如何选择对很多小伙伴来说可能还有些难度。根据多年的实验经验总结了以下几点。

  捕获抗体最好是挑选有文献报道或厂家验证过IP应用的产品更稳妥。为了减少或消除IP洗脱产物中抗体重轻链的影响,可以:

  1)选择与捕获抗体不同种属的检测抗体,配合种属特异性二抗,能基本消除IP洗脱时的抗体重/轻链干扰,如下图;

  2)捕获抗体与检测抗体为同一抗体时,可选择构象特异性二抗或专门抗重链(或轻链)的二抗;

  3)检测抗体选择直接标记HRP的一抗;

  4)捕获抗体共价偶联在beads(可减少IP产物中抗体重链);

  5)对于待捕获的靶蛋白为标签融合蛋白时,可以选择抗特定标签蛋白的纳米抗体。

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