免疫沉淀抗体选择技巧

2022-10-09 10:34:38

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　　免疫沉淀实验中需要用到捕获抗体（IP）、检测抗体以及二抗（WB），如何选择对很多小伙伴来说可能还有些难度。根据多年的实验经验总结了以下几点。

　　捕获抗体最好是挑选有文献报道或厂家验证过IP应用的产品更稳妥。为了减少或消除IP洗脱产物中抗体重轻链的影响，可以：

　　1）选择与捕获抗体不同种属的检测抗体，配合种属特异性二抗，能基本消除IP洗脱时的抗体重/轻链干扰，如下图；

　　2）捕获抗体与检测抗体为同一抗体时，可选择构象特异性二抗或专门抗重链（或轻链）的二抗；

　　3）检测抗体选择直接标记HRP的一抗；

　　4）捕获抗体共价偶联在beads（可减少IP产物中抗体重链）；

　　5）对于待捕获的靶蛋白为标签融合蛋白时，可以选择抗特定标签蛋白的纳米抗体。