体外培养的原代细胞或细胞株要在休外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，维持细朐种的延续。放平细胞瓶，当发现悬浮细胞长到瓶壁85%～90%时，从容器中取出细胞，以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为悬浮细胞的传代培养。

　　一、实验材料

　　CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯、悬浮细胞株、完全培养基（RPML/1640或DMEM）。

　　二、操作步骤

　　①预热培养用液：把已经配制好的培养液瓶子放入37℃水浴锅内预热。

　　②用75%酒精棉球擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

　　③正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。

　　④点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

　　⑤超净工作台内拆除已消毒空培养瓶的外包装。

　　⑥取出预热好的培养用液：取出已经而执好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后放入超净工作台内。

　　⑦从培养箱内取出悬浮细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用75%酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

　　⑧静置：超净工作台内将需传代的培养瓶直立静置半小时左右，待大部分细胞都沉降到细胞瓶底，轻轻吸出1/2~2/3的旧培养基。

　　⑨分瓶：加入新鲜培养液，按1∶2或1∶3的比例分装到2或3个培养瓶中，再逐瓶加入新鲜培养基。

　　若想节约时间，并且离心对细胞影响也不大，可采用离心的方式取代静止分离。将培养

　　瓶中的悬浮细胞从培养箱中取出，超净工作台内将所有含细胞的培养液转入离心管，1 000 r/ min离心5 min，弃上清。加入定量新鲜培养基重悬后以1:2或1∶3的比例分装到2或3个培养瓶中培养。

　　如果实验需要，可以在分瓶前计数，细胞的浓度一般不低于5×105个/mL。做好标记。