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悬浮细胞传代实验所需材料以及操作步骤(悬浮细胞的传代培养)

发布时间:2022-09-19 10:29:11 阅读:14202次 来源:百度学术

  体外培养的原代细胞或细胞株要在休外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,维持细朐种的延续。放平细胞瓶,当发现悬浮细胞长到瓶壁85%~90%时,从容器中取出细胞,以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为悬浮细胞的传代培养。

  一、实验材料

  CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯、悬浮细胞株、完全培养基(RPML/1640或DMEM)。

  二、操作步骤

  ①预热培养用液:把已经配制好的培养液瓶子放入37℃水浴锅内预热。

  ②用75%酒精棉球擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

  ③正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。

  ④点燃酒精灯:注意火焰不能太小。

  ⑤超净工作台内拆除已消毒空培养瓶的外包装。

  ⑥取出预热好的培养用液:取出已经而执好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后放入超净工作台内。

  ⑦从培养箱内取出悬浮细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用75%酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。

  ⑧静置:超净工作台内将需传代的培养瓶直立静置半小时左右,待大部分细胞都沉降到细胞瓶底,轻轻吸出1/2~2/3的旧培养基。

  ⑨分瓶:加入新鲜培养液,按1∶2或1∶3的比例分装到2或3个培养瓶中,再逐瓶加入新鲜培养基。

  若想节约时间,并且离心对细胞影响也不大,可采用离心的方式取代静止分离。将培养

  瓶中的悬浮细胞从培养箱中取出,超净工作台内将所有含细胞的培养液转入离心管,1 000 r/ min离心5 min,弃上清。加入定量新鲜培养基重悬后以1:2或1∶3的比例分装到2或3个培养瓶中培养。

  如果实验需要,可以在分瓶前计数,细胞的浓度一般不低于5×105个/mL。做好标记。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1601.html

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