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细胞污染怎么去鉴别(怎么判断细胞污染)

2022-09-10 10:45:54
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  1、细菌、真菌污染的检测

  (1)肉眼观察

  细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生,而且增生迅速,若有污染,在48小时内可明显观察到,例如培养液变混浊,或略加振荡有很多漂浮物漂起。

  (2)接种观察

  采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种,也可发现是否有污染。

  (3)镜下观察

  在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮,即为细菌污染。

  若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。

  2、支原体污染的检测

  (1)相差显微镜观察

  直接取少许培养液滴在载物片上,再盖上盖片观察,支原体在镜下呈暗色微小颗粒,多位于细胞与细胞之间,有时可见类似于布朗运动的表现。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。

  (2)荧光染色法观察

  用荧光染料Hoechst33258,此染料能与DNA特异地结合,可使支原体内的DNA着色,荧光显微镜下支原体呈绿色小点,散在于细胞周围或附于细胞表面。

  (3)电镜检测

  若条件许可,可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48~72小时,细胞接近汇合前,用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。

图例

支原体扫描电镜图片

  (4)培养检测

  将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基,培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀,然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中,再用琼脂培养基做分离培养,37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。

  3 、病毒的检测

  1) 应用电镜技术快速诊断动物病毒病

图例

冠状病毒电镜图

  2) 逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒

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