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小鼠悬尾实验过程中的细节

发布时间:2022-09-06 10:21:20 阅读:12832次 来源:百度学术

  小鼠悬尾测试可用于筛选潜在的抗抑郁药物,并评估预期会影响抑郁相关行为的操作。测试时,用胶带将老鼠的尾巴悬挂起来,使其无法逃脱或抓住附近的物体。整个测试期通常持续时间为6分钟。悬尾实验是药物发现中一种有价值的工具,可用于高通量筛选潜在的抗抑郁化合物。今天,我们将和大家一起了解悬尾实验测试过程中的细节,并特别强调可能发生的潜在问题以及如何避免这些问题。

  悬尾实验箱

  悬尾实验箱通常有塑料制成,尺寸通常为高55cm*宽60cm*深11.5cm,为了防止动物相关观察或互动,实验箱中间有挡板将小鼠隔开来,同时保证每只小鼠的隔间足够宽敞,小鼠不能触碰到墙壁,每个隔间大小建议不低于这个尺寸:高55cm*宽15cm*深11.5cm。小鼠的鼻子与实验箱地板之间的大致距离建议为 20-25 cm。

  每个隔间顶部装有一个铝制吊杆,用于悬挂小鼠的尾巴。需要注意,如果使用大型远交小鼠品系(例如 CD-1),则需要相应增加尾部悬吊箱的各个隔室的大小。在每个隔间的底部,放置一个可拆卸移动的铝制托盘,用于收集动物的粪便或尿液。

  胶带

  胶带是我们日常生活中比较常见的工具,但是在悬尾测试中胶带的选择是至关重要的。胶带应牢固地粘在小鼠的尾部和吊杆上,并且强度足以承受被测小鼠的重量。同时,胶带也不应该太粘,因为我们会在每个测试结束后取下动物,避免给动物带来疼痛应激。这里,我们建议选择医用胶带,动物的尾巴皮质比较接近于人的皮肤。另外,胶带在每个小鼠尾巴粘贴的位置也要注意,尽量保持统一。

  悬尾行为分析软件

  悬尾分析软件的核心算法选择也很重要,与旷场实验等测试不同,悬尾测试不应该追踪动物的质心/重心。VisuTrack动物行为分析软件(上海欣软)通过考察小鼠四肢的真实运动情况,实时分析小鼠摇摆不动(绝望状态)、挣扎行为等指标,自动存储原始实验视频。

  白噪声发生器(可选)

  噪声发生器可以掩盖间歇性或者突发的环境声音。特别推荐在实验室环境中使用噪音发生器,在这些环境中可以听到可能会吓到老鼠的突然响亮的噪音。在部分实验室中,环境噪声水平(未激活白噪声发生器)约为 60 dB。在进行 TST 的位置激活白噪声发生器的总声级为 70-72 dB。但需要注意的是,这些数字仅作为示例提供,每个实验室应根据其独特的环境和情况选择合适的噪音水平。

  清洁用品

  每次测试结束后,使用消毒溶液,彻底擦拭悬挂盒。

  亚克力透明套管(可选)

  为了有效防止小鼠在测试过程中长时间攀爬,可以使用亚克力套管套在小鼠尾巴上,再进行悬挂,具体方法可以参考以下视频,效果棒棒哒!

  悬尾实验测试步骤

  1、调节好相机,尽可能靠近动物,获得较高清晰度的视频

  2、开启白噪声发生器,掩盖外部噪声。避免高音量,并确保所有动物使用相同级别的白噪声。

  3、将待测小鼠带入测试房间适应,通常至少一小时。请注意,放置在同一个房间的其他动物可以感知嗅觉和超声波信号。

  4、将胶带粘在老鼠的尾巴上。使用胶带的标记端并确保胶带粘在尾部并重新贴在自身上。胶带应贴在尾巴的最末端,在胶带外留下 2-3mm的尾巴。

  5、以最短的时间,将胶带或者老鼠尾巴固定到悬尾箱顶部的挂钩上,因为过长时间的拖延会对小鼠有压力。

  6、使用VisuTrack软件预先设置好的参数,实验采集分析6分钟。

  7、将小鼠送回它们的饲养笼后,从收集盘中丢弃粪便和尿液,并用消毒溶液擦拭装置。

  实验“解密”

  1、小鼠悬尾实验测试时长通常为6分钟,与强迫游泳实验不同,小鼠在悬尾实验早期更容易表现出不动状态。

  2、测试中,只有小鼠的前肢活动,但后肢未动的情况,一律视为动物摇摆不动行为(绝望状态)。

  3、由于运动惯性,小鼠的类似“钟摆”活动也需要一律视为动物摇摆不动行为(绝望状态)。

  4、悬尾实验较强迫游泳实验,没有因浸入水中而导致体温过低的风险,这2个实验在灵敏度和性能存在各种重要差异,并且一项测试的结果不一定会在另一项测试中复制

  实验差异,可参考这2篇文献:

  Cryan JF, Mombereau C, Vassout A. The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: review of pharmacological and genetic studies in mice. Neurosci. Biobehav. Rev. 2005;29:571–625.

  O'Leary OF, Cryan JF. In: Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould TD, editor. Vol. 42. Humana Press; 2009. pp. 119–137.

  5、TST 不建议使用体重较大的大鼠,因为这些动物仅靠尾巴支撑体重可能会很痛苦。同样,对于异常重的小鼠(例如用于模拟肥胖的小鼠)应谨慎,在这些情况下,实验者应寻找替代测试,例如强迫游泳测试。

  6、预先用旷场实验测量小鼠的整体活动水平很有必要,可有效防止在悬尾实验中产生虚假结论。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1558.html

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