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细胞生长缓慢是什么原因,让细胞生长缓慢的两大原因解析

2022-08-25 10:44:46
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  就一个实验室而言无论运作的多么好,总会因为革新技术或拓展方向二影响原来的流程,从而产生各种各样的问题。有些地方错误的操作有可能带来严重的后果,那么今天主要列举细胞生长缓慢的两大原因。

细胞生长缓慢是什么原因,让细胞生长缓慢的两大原因解析

  一、培养体系出现问题

  1.检查你所培养的细胞是否存在污染。

  (1)如果培养细胞未添加抗生素,细胞污染则是不可避免的。

  ① 用肉眼和显微镜进行检查。

  ② 如果细胞被污染则要弃掉。

  (2)由于支原体污染不容易觉察到,因此必须定期检测。

  (3)检测可能污染的途径和原因。

  2.检查你用于培养细胞的培养基和血清(例如:是否批次不同或厂商不同)。如果你常规使用的是粉剂或10×储存液,而现在购买的培养基更换为1×液体,而随后证明问题就出自于此。

  3.如果问题与培养基无关,那么很可能还是细胞的问题。

  (1)复苏另一支冻存的细胞,并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开,以免在培养之初就产生污染。随后按(2)~(4)步的方法做排查:

  (2)对传代培养的细胞进行计数,并绘制生长曲线,与以前培养该细胞的资料进行比较,检查是否有下列改变:

  ① 传代时是否接种密度过低。

  ② 细胞传代是否过于频繁。

  ③ 传代前细胞平台期是否过长。

  (3)是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号,检查批号和供货商。

  (4)是否细胞分离过程中严重损伤了细胞,应检测:

  ① 胰蛋白酶(其他消化试剂)消化时间是否过长。

  ② 消化液的浓度和活性是否过高、过强。

  ③ 胰蛋白酶消化时,孵箱温度是否过高。

  ④ 吹打消化细胞时是否过于用力。

  ⑤ 细胞是否对 EDTA过于敏感(如果添加了EDTA)。

  ⑥ 胰蛋白酶稀释是否有误。

  ⑦ 是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。

  二、检查共用的设备和试剂

  温室和孵箱温度

  (1)温度和温度设定不准。

  ① 自动调温器损坏。

  ② 开关孵箱门过于频繁。

  ③ 孵箱门未关紧。

  ④ 风扇损坏造成散热不均。

  (2)孵箱湿度不能维持

  ① 水盘中未加水。

  ② 孵箱有渗漏。

  ③ 开关孵箱门过于频繁。

  ④ 在Petri培养皿中放置一定量的PBSA,每日称重,以检查蒸发率。

  (3)孵箱的CO2浓度不准

  ① 开关孵箱门过于频繁。

  ② CO2控制器出现问题。


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