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冻存的细胞怎么复苏,冻存细胞复苏的步骤及注意事项

2022-08-24 10:43:29
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  避免污染是培养细胞最关键的一部分了,这一步做好了我们才可以进行接下来的细胞复苏,培养,冻存等等步骤,今天我们就来说一下冻存细胞复苏的步骤及需要注意的一些问题。

冻存的细胞怎么复苏,冻存细胞复苏的步骤及注意事项

  1.解冻

  从液氮罐中取出细胞,观察冻存管内没有多余液氮,迅速放入水浴锅中快速摇晃,直至冻存液完全融化。尽量越快解冻越好,在一两分钟内让冻存液融化。

  2.离心

  将冻存管的细胞900-1000rpm离心2分钟,准备好已经复温的完全培养基,10ml-15ml即可。

  3.重悬吹散

  离心好的细胞弃去冻存液,用准备好的完全培养基重悬细胞,将细胞吹散移到培养瓶中。

  4.培养观察

  记录好复苏细胞的名称,复苏时间及冻存批次,放入37℃培养箱,第二天观察细胞状态及存活率并换液。

  冻存细胞复苏注意事项

  1.复苏细胞最重要的一点是要避免污染,在复苏之前要对使用的物品进行灭菌处理,可以在超净台点上酒精灯。

  2.在水浴锅中复苏细胞要尽快使其解冻,融化太慢或者整个复苏过程时间太长如会对细胞造成损伤,影响细胞存活率。

  3.在将细胞移到培养瓶的过程中吹打要轻柔一点,尽量使其不能有气泡,刚复苏的细胞都比较脆弱。

  4.在从液氮中取出细胞的同时也要注意自身安全,防护服护目镜这些也是要穿戴的。

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