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是什么原因让细胞生长缓慢,细胞生长变慢是原因?

2022-07-28 10:27:24
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  导致细胞生长缓慢的常见原因:

  一、培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子,出现这种情况一般都是小伙伴们购买细胞后没有按照ATCC或国内细胞库的方法配制培养基,就使用实验室师兄师姐用的培养基去养细胞。处理方法一般来说就是按照方法配制培养基,或是直接购买所养细胞专用的培养基。

  二、细菌、支原体、真菌等污染:虽然现在培养基里面一般都会添加双抗(和),但是如果无菌操作观念不强,依然很有可能导致污染。处理方法:如果有冻存的细胞,就可以把污染的细胞丢弃处理,当然,丢弃不是随意扔进垃圾桶就可以了,要按照实验室生物安全规范操作进行。然后重新复苏培养,建议把培养箱进行全面的消毒处理。若是没有冻存,而这种细胞又是很珍贵的,常见的处理方法就是药物处理:细菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染就加抗真菌药物;支原体污染就加抗支原体药物,具体药物可以咨询相关公司的技术支持,他们会比较专业。

  三、很多细胞的生长存在密度依赖性,如果传代后,细胞的密度太小,也是会影响到细胞生长的。这个时候没什么特别好的处理办法,只得勤换液。如果细胞培养瓶使用的是T75倒可以消化、离心、重悬,然后接种到T25的培养瓶中培养。

  四、冻存细胞DMSO(二甲基亚砜)加的量不正确,没有逐步梯度降温。下次复苏后的细胞总是长不好。处理方法:按照的冻存方式配制冻存液。有的细胞适合10%的DMSO,有的细胞适合5%;严格遵守逐步梯度降温原则,细胞复苏时快速解冻。

  五、换液间隔时间太长,有的小伙伴养细胞真的很“佛系”,想起了就去换个液,信奉一句话“你已经是成熟的细胞了,应该学着自己觅食,成长”。这种情况下细胞培养瓶中就会积累很多细胞代谢废物,影响细胞活性。建议:勤换液

  六、细胞“消化”时间过长,对细胞造成损伤;另外中一般会添加EDTA,螯合钙离子,影响细胞贴壁。处理方法:控制好细胞“消化”时间,尽量去除干净和其中的EDTA.

  七、PH:细胞需要在一定的PH值下生长,这个道理小伙伴们都懂。但是很多时候PH都是我们忽略的,也是小编今天要强调的一点。我们使用的培养基可能会随着使用时间的加长而缓慢变碱哦!(当然,也有可能会变酸,但常见的是变碱),一般来说,过碱的培养基会影响到细胞生长。处理方法:简单的就是换新鲜培养基呗!当然,如果有时间和有条件也可以调一调培养基的PH值。

  细胞增殖变慢有以下原因:

  1. 消化过度 2. 传代过密 3.细胞营养不良 4.细胞频繁传代 5.细胞状态不佳或老化 6.细胞存在污染。

  一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时,则应使用5% CO2培养细胞。

  定期(每周一次)更换水盘里面的水,水盘的水必须使用无菌蒸馏水或无菌去离子,水盘中可添加1%硫酸铜以预防霉菌污染。

  依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的一个重要原因。按照我们的经验:一般倍增时间24 h内的细胞,传代比率1:6-1:12为宜,倍增时间24-48 h的细胞,传代比率1:3-1:8为宜,倍增时间超过48h的细胞, 传代比率1:2-1:4为宜。


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