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动物细胞培养有什么条件(细胞培养的几个要素)

发布时间:2022-07-13 10:41:53 阅读:11162次 来源:百度学术

  细胞培养的条件

  1.所有与细胞接触的设备、器材和溶液等,都必须保持绝对无菌,避免细胞外微生物的污染。

  目前最可靠和最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。

  如:玻璃制品、布类、金属制品:6.8kg20min。

  橡胶制品:3.6~4.5kg10min。

  培养用液,如Hanks液,水解乳蛋白:3.6~ 4.5kg10min。

  实验中染菌物品和动物尸体等:6.8 kg20min。

  试管、吸管等,则可采用干热灭菌;

  一切不适于加热灭菌的液体,如人工合成培养液、小牛血清、胰蛋白酶等溶液,可采用过滤法除菌。

  细胞培养中常用的消毒剂浓度及其使用场合

  2.必须有足够的营养供应,而绝对不可有有害的物质,包括极微量的有害离子的掺入,为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量。

  细胞培养中对水的质量要求很高(见水处理)。

  3.保证有适量的氧气供应。

  细胞代谢需要有空气,否则细胞死亡。在用培养瓶进行静止培养,或用转瓶进行旋转培养时,只要培养的液体量不超过总容量的30%,通过与液面的空气交换,可以保证细胞有足够的氧气。当用罐子深层培养时,则必须通气,一般采用含5%CO2的空气,或根据需要将CO2、N2、O2和空气以不同比例混合,过量氧对细胞的生长也不利。

  4.需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。

  细胞在代谢过程中会产生大量代谢废物,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等,这些产物对细胞的生存有害,必须及时清除。在小量培养时,当培养基中酚红指示剂显示黄色,表示已有相当量乳酸产生,要及时更换新鲜的培养基。在大量培养时,则需随时测定葡萄糖和乳酸等含量,并调节灌流速度,使代谢产物保持在无害水平下。

  5.有良好的适于其生存的外界环境,包括温度、pH、渗透压和离子浓度等。

  不同的细胞对pH的要求不同,一般来说适于细胞生长的pH在6.8~7.4,过高或过低均不利于细胞生长。如上所述,细胞在代谢过程中会产生大量乳酸,使培养的pH下降。为了保持培养液的pH,常在培养液内加入各种缓冲系统,如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3(CO2)、Tricineglycine,以及加缓冲剂Hepes液(常用浓度为10~50mol/L).

  6.及时分种,保持合适的细胞密度(见细胞传代)

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