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大鼠、小鼠心脏干细胞分离培养方法

2022-07-07 10:40:39
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  心脏病是引起人类死因的一种代表性疾病,如果失去了心肌细胞,就会引起心力衰竭等心脏疾病。心肌细胞几乎没有再生能力,一旦失去就不能再生。从前认为心脏当中没有干细胞,所以心肌没有再生能力,但是近年的研究表明,成体心脏内部也会存在一些心肌干细胞。

  细胞培养操作:

  1.摘取出心脏,去掉心脏包膜,把心尖部分剪下来(心尖部分是心室部分,心肌细胞含量高)。

  2.剪碎,移入15或50ml离心管中,用PBS多洗几遍,尽量把血细胞洗掉。

  3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培养基,37℃、一小时浸泡。

  4.采用贴块法:用枪把组织块连同培养基一同移入T25瓶中,然后用枪吸出培养基。在培养箱中放置1-2小时,待组织粘贴在瓶底后,加入3ml含20%血清的IMDM培养基。

  5.在贴块培养到第三、四天时,从组织块上会脱落一些细胞团和单个细胞,收集到15ml离心管中。

  6.采用300rpm离心(或自然沉淀),去上清,取沉淀部分的细胞培养(多为细胞团)。

  7.用IMDM/DMEM/F12完全培养基培养:10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。

  8.细胞团中的细胞在第二天就会出现圆形扩散生长(呈集落生长,像太阳发光的模样),细胞形态不像成纤维细胞那样呈梭形状,而是有些偏圆。

  9.心脏干细胞生长速度很快,两三天就能长满。

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