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c2c12小鼠成肌细胞培养方法

发布时间:2022-06-18 10:26:41 阅读:1822次 来源:海星生物

  C2C12细胞株是YaffeD,SaxelO建立的小鼠成肌细胞系的亚株。该细胞分化较快,可形成能收缩的微管,产生特异的肌肉蛋白。在骨形态形成蛋白(BMP-2)的作用下,该细胞可由成肌细胞分化为成骨细胞。检测发现该细胞鼠痘病毒阴性。

c2c12小鼠成肌细胞培养方法

  细胞复苏

  溶解细胞过程要迅速;已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久,需要尽快离心去除DMSO。

  细胞冻存

  冻存条件

  60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存。

  细胞冻存步骤

  1.常规方法收集对数期的贴壁 细胞或悬浮细胞于离心管中。

  2.按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的大小计算所需冻存细胞数(参考数量: 5x10^5~ 5x10^6cells/mL)。

  3.离心收集细胞。(参考离心条件: 4℃, 250g,离心4~6 min)。

  4.收集培养细胞沉淀, 彻底弃去离心管中的上清液。

  5.加入适量的HyCyte™ 一步冻存液于离心管中。轻柔地混匀细胞,制成细胞混合液。

  6.将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管1 mL或1.5 mL。

  7. 立即将冻存管直接置于-80°C冰箱中(直立放置)完成"一步"冻存操作, 24小时后移入液氮或者-80C长期保存。

  细胞冻存时,尽量吹散细胞,注意控制吹打力度。

  细胞培养条件

  培养基:DMEM-H+10%FBS+1%P/S

  推荐传代比例:1:3-1:6,每2-3天换液一次

  培养条件:气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃

  传代操作

  去掉培养皿中的培养基,加入PBS进行冲洗,并去上清;

  加入胰酶进行润洗,并去上清;

  放入CO2培养箱消化2-4min;

  加入完全培养基终止消化,并吹打均匀。

  注意事项

  在培养过程中,保持细胞汇合度30%~90%

  每一步操作都要轻柔小心,以免细胞受损

  选用优质培养基,减少有害物质对细胞的刺激

  常见问题

  1. 为什么会出现空泡?

  可能是铺板时铺得不够均匀,局部过于密集,密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多。也可能是血清差,需要更换优质血清,及时换液。

  2. 为什么细胞长得慢?

  可能是细胞接种得太少,细胞密度太低。可以先培养,然后消化重新铺瓶,提高密度培养。

  3. 为什么细胞状态变差,容易漂?

  可能是血清问题,建议换血清,并注意血清要程序解冻,不能水浴化开;也有可能是细胞生长密集,需要及时传代,并不是细胞长满才传代,当有个别地方长得过于密集,容易叠加的时候应该就要传代了。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1278.html

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