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小鼠成肌细胞(C2C12 )成肌分化培养方法与流程

发布时间:2022-06-17 10:16:19 阅读:19072次 来源:普诺赛生物

  C2C12 (小鼠成肌细胞)是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌细胞株的亚克隆。C2C12细胞分化很快,容易形成可伸缩的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)处理C2C12细胞,会导致C2C12细胞的分化途径从成肌细胞转换为成骨细胞。

  C2C12作为研究肌肉理想的细胞模型,在实验研究中常诱导其分化为多核肌管。成肌分化在肌肉再生中起重要作用,它是通过一种高度协调的序列程序来产生成熟的骨骼肌的过程。

  基础信息

  生长特性:贴壁细胞

  细胞形态:成肌细胞样

  生长培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S

  推荐传代比例:1:3-1:4

  推荐换液频率:2~3次/周

  倍增时间:~20小时

  冻存条件

  冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

  温度:液氮

  培养条件

  气相:空气,95%;CO2,5%

  温度:37℃

图1. C2C12细胞正常生长

图1. C2C12细胞正常生长

  细胞状态直接影响着分化潜力,要想C2C12细胞分化做得好,首先要在培养上下功夫。该细胞的换液和传代步骤,参照其他贴壁细胞进行操作即可。除此之外,还有以下三点,需要留意:

  1

  该细胞生长速度快,容易分化,建议密度达70%时传代;

  2

  不要让细胞长得太满甚至开始融合,影响后续成肌分化率;

  3

  细胞消化完全后再吹打混匀,不要用枪头把没有消化好的细胞吹下来,以免细胞成团。

  待细胞生长至汇合度为80%左右时,即可进行诱导分化。具体步骤如下:

  01

  丢弃旧培养基,用PBS清洗两次;

  02

  换分化培养基(高糖DMEM+2%马血清+1% P/S)诱导,然后置于CO2恒温培养箱中进行培养;

  03

  每24h换液一次,在显微镜下观察细胞形态和生长状况。诱导分化成功时,可以看见肌管表现为厚的管状结构,有时为多核。

图例

图2. C2C12细胞分化

  小贴士

  ■ 细胞代数不要太高;

  ■ 若加入分化培养基后,细胞仍然继续生长,可用吉姆萨染色验证是否有分化了的肌纤维;

  ■ 成肌分化过程中会有少量细胞凋亡,属于正常现象。

  参考文献

  [1]张琳. EPA和DHA对C2C12成肌细胞增殖,分化和凋亡的影响[D]. 武汉轻工大学, 2018.

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1273.html

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