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什么是细胞活性,细胞活性常见的检测方法

发布时间:2022-04-29 10:28:36 阅读:16562次 来源:CST中国

  实验细胞保持正常状态是实验成功的基石。您在蛋白表达敲低、药物处理或特殊培养细胞之后,是否有过第一次实验结果令您特别兴奋、却在之后的重复实验中发现了偏差而令您的心情一落千丈的经历?这是这跟您样本中死亡细胞的水平有关。这也是我们今天想要说的一个话题——定期检测细胞活性,随时关注细胞状态。即便这组数据不是您课题中所必须的,但它却是您控制实验的有效手段。

什么是细胞活性,细胞活性常见的检测方法

  细胞活性是指样本群体中健康细胞所占的比例。细胞活性的检测对于观察实验过程中细胞的生理状态是必须的。细胞活性会受环境因素影响,包括细胞培养各参数的改变、药物和生长因子的刺激以及在各种疾病下作出的反应。例如,癌细胞表现出细胞活性加强,进而引起细胞异常增殖及逃避细胞凋亡,与之相反的是,神经退行性和其他组织退行性疾病则以进行性细胞丢失为特征。损伤和感染也会对细胞存活产生负面影响,导致坏死或凋亡。以上,细胞本身的健康与疾病之间的关系案例,警示我们在不同实验背景和模型系统中测量细胞活性十分必要。

  科学家们已经开发了用于不同实验平台的多种检测细胞活性的技术。具体来说,细胞检测可以根据检测原理进行分组,包括细胞增殖、质膜完整性、代谢活性和线粒体功能。我们除了通过活性检测快速查看细胞群体的总体健康状况,还可以达到更深层的需求,就是通过它来确定活性受损时细胞的死亡方式 - 细胞凋亡还是坏死。

  XTT 检测(XTT Cell Viability Kit #9095)是一种可用于检测细胞活性的代谢性检测方法。在健康细胞中,XTT 通过线粒体酶转换成橙色的甲瓒染料。接着通过检测 450 nm 处的相对吸光度来估计活细胞数量。这种方法的优点之一是操作简单, 不需要细胞固定、通透或二次检测方法,并且能够在分析后还能继续检查细胞。

  代谢检测的第二个方式是 刃天青检测(Resazurin Cell Viability Kit #11884)。将刃天青试剂添加到细胞培养物中,在健康细胞中,刃天青试剂通过脱氢酶还原成为荧光试卤灵,最终试卤灵的量与样品中的活细胞成比例。与 XTT 检测类似,刃天青检测中使用的细胞也可以继续用于下游分析。

  活/死细胞计数检测是评估细胞活性的另一种常用方法。这一类的检测使用细胞通透性活体染料、细胞不通透染料或两者的组合,同时标记细胞群体中的活细胞和死细胞。例如,台盼蓝是一种偶氮染料,无法穿透细胞膜,因此不会进入健康细胞。但是,发生膜损坏的死亡细胞会吸收台盼蓝,所以最终能够使用血细胞计数器计数死亡(蓝色)和存活(无色)细胞的数量。

  另外,免疫组织化学法 (IHC) 也可以检测细胞活性。这种方法通常用于观察在健康与病变组织中靶蛋白的分布及表达模式,同时在保持组织切片的完整细胞架构的情况下确定发生细胞死亡的区域。通过使用细胞增殖(包括 Ki67 或 PCNA)或凋亡(包括裂解的 Caspase-3 和 PARP)的标记物进行定量分析。


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