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从零开始养SV-HUC-1(sv-huc-1人输尿管上皮永生化细胞)

发布时间:2022-04-24 10:27:40 阅读:14702次 来源:普诺赛

  SV-HUC-1 (人输尿管上皮永生化细胞),是由猿猴空泡病毒40转染至1名11岁男孩的泌尿道上皮细胞,而建立起来的永生化细胞系。其分化特性与正常细胞相似,培养简单,可无限传代,却不属于肿瘤细胞[1]。

  ❖生长培养基:

  Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S

  ❖生长特性:贴壁,上皮细胞样

  ❖推荐传代比例:1:2-1:4

  ❖推荐换液频率:2~3次/周

  ❖培养条件:

  气相:空气,95%;CO2,5%

  温度:37℃

  ❖冻存条件:

  55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

SV-HUC-1细胞正常生长

SV-HUC-1细胞正常生长

  细胞传代

  01 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃;

  02 用PBS冲洗细胞(每10cm2培养表面积约2mL 溶液)。从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液,以避免搅动细胞层,前后轻柔摇晃容器数次;

  03 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃,向培养瓶中加入0.25%胰酶(试剂量应足以覆盖细胞层);

  04 轻轻摇晃容器,使试剂完全覆盖细胞层,T25 细胞培养瓶留 200μL左右即可;

  05 将培养容器放在培养箱中孵育5分钟左右,在显微镜下观察细胞解离情况;

  06 当细胞解离程度≥ 90%时,倾斜培养容器,使细胞上液体尽快流尽,加入所用胰酶两倍体积的完全培养基,吹打细胞层表面数次,使培养基分散;

  07 将细胞转移到无菌离心管中,以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟;

  08 用最少体积的完全培养基重新悬浮细胞沉淀,将细胞悬液按照推荐比例稀释,并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中,再将细胞放回培养箱。

  1、待细胞汇合度达到80%-90%时,即可进行传代培养;

  2、该细胞较难消化,注意延长消化时间。待消化到细胞收缩变圆,轻拍培养瓶侧边,细胞可以滑落方可终止消化;

  3、如果使用培养瓶,在将其放入培养箱前,应将瓶盖旋松,以便进行充分的气体交换,除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖。

  ●参考文献●

  [1] 王惠惠, 陈锋, 朱佳玉, 席淑华, 孙贵范. 亚砷酸钠对SV-HUC-1细胞NRF2通路影响[J]. 中国公共卫生, 2017, 33(1): 95-97.


本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1080.html

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