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分子实验-免疫荧光工作流程(免疫荧光操作步骤)

2022-01-11 09:52:11
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  免疫荧光工作流程

  凭借多年的研究、开发经验,在免疫荧光试剂的生产方面获得了相当多的专业知识。

  载玻片准备

  • 最大化组织切片在载玻片上的保留和粘附。

  • 划分和隔离各个部分以减少试剂使用或进行离散处理

  抗原修复

  在具有确定 pH 值和盐溶液的醛固定制剂中增加组织抗原性(“免疫反应性”)。醛固定(例如福尔马林)和石蜡包埋过程中的热暴露相结合可以使表位无法检测到。在抗原修复过程中,组织用缓冲溶液和高温的组合进行处理,这会导致暴露抗原以进行检测的蛋白质的构象发生变化。

  淬火/块

  使用封闭溶液减少或消除组织切片和细胞制剂上不需要的背景(非特异性)染色。非特异性染色可由内源性酶或组织成分引起,包括内源性酶活性、Fc 受体的存在或检测试剂与组织或细胞蛋白和其他大分子的相互作用。根据阴性对照部分的结果选择阻塞解决方案。

免疫荧光

  一抗/凝集素

  使用经过验证的特定标记物识别和定位细胞或组织制剂中的目标蛋白抗原或糖蛋白部分。选择一抗或凝集素时,请考虑组织种类和组织制备方法(例如固定),以确保特异性结合您的靶标。

  二抗

  选择高度纯化和最佳偶联的检测试剂以满足检测条件,例如一抗种类、组织种类、靶标丰度和易用性(浓缩或即用型)。

  三级试剂

  如果需要,提高检测的灵敏度,以显示弱或瞬时表达、上调或未知(例如基因敲入研究)的抗原。

  自发荧光猝灭剂

  由于醛固定、红细胞和胶原蛋白和弹性蛋白等结构元素,去除组织切片中不需要的荧光。

  复染/安装

  保留和保留荧光信号强度,无论是否使用可选的复染剂,以增加显微镜曝光时间并存档以备将来成像和参考要求。

免疫荧光

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