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分子实验-免疫荧光技术在内分泌自身免疫病诊断中的应用

发布时间:2022-01-08 10:16:12 阅读:16012次 来源:百度学术

  在自身免疫性疾病的研究中,实验室在通过免疫学研究预测或检测抗原(Ags)和抗体(Abs)之间的反应方面发挥着非常重要的作用。

  许多研究人员应用这些技术,年复一年地变得更加复杂和准确,正如 Betterle [ 1 ]所报道的那样,用于检测受自身免疫性疾病影响的患者中自身抗体的存在。

  免疫组织化学和免疫酶学技术

  抗原-抗体相互作用

  免疫学和免疫防御的关键反应是 Abs 和 Ags 相互作用形成不可逆的大分子复合物。这些相互作用,类似于在酶-底物相互作用中观察到的那些,涉及抗原决定簇的非共价结合。

  在研究中,纯化的抗体(单克隆或多克隆)最常用于识别和定位存在于体液中或附着在某些细胞或组织抗原上的细胞内和细胞外蛋白质或自身抗体。抗体用于流式细胞术、免疫沉淀 [ 2 ]、蛋白质印迹分析 [ 3 ] 以及免疫组织化学或免疫荧光 (IF) [ 1 ] 以检查组织切片中的蛋白质表达或定位细胞内的蛋白质。

  实验室技术的一些一般特征(准确度、精密度、线性度、灵敏度、特异性和合理性)也必须应用于免疫荧光技术。这一点很重要,因为有时很难找到所有这些参数同时出现在同一个测试中,因为例如灵敏度并不总是与特异性一致。在这些参数之间找到平衡当然是困难的,但这必须是实施各种测试和国际标准化研究的目的。

  其他一些参数(底物的制备、溶液缓冲液、固定等)[ 4 ] 可能在免疫荧光研究中发挥重要作用:过去,实验室的技术依赖于技术人员的技能和灵巧,今天有许多专门从事免疫组织化学底物制备的公司。

  今天,技术程序发生了重大变化,因为以前的手动技术已被自动化系统取代。但是今天,只有通过显微镜进行目视检查的技术人员才能阅读反应。

  免疫荧光技术

  免疫荧光是一种组织化学实验室染色技术,它利用 Abs 对其抗原的特异性。它是一种广泛用于免疫组织化学的方法,基于使用一些荧光染料 [ 5 ] 来可视化 Abs 的位置。

  免疫荧光技术于 1942 年首次被描述,并于 1950 年由 Coons 改进,该技术使用荧光显微镜能够读取在载玻片上制备的组织或细胞上的特异性免疫反应。随后,在 1963 年,在红斑狼疮皮损中沿真皮-表皮交界处描述了 IgG 和 C3 的颗粒状沉积物。1964 年,Beutner [ 6 ] 使用间接免疫荧光 (IIF) 技术来证明天疱疮患者血清中的抗体,同年,该技术被用于检测内分泌自身免疫性疾病中最重要的自身抗体。

  有四种主要的 IF 技术:

  直接免疫荧光技术:它是一种一步式组织学染色程序,用于鉴定与组织抗原结合的体内抗体,使用用荧光团标记的单一抗体 [ 5 ] 对组织或细胞进行染色。抗体识别目标分子并与其结合。

  间接免疫荧光技术:它是一种两步血清学技术,用于检测体液中的循环抗体,使用两种抗体。未标记的第一(一抗)抗体特异性结合靶分子,而携带荧光团的二抗识别一抗并与之结合。

  间接免疫荧光补体固定 (IIF-CF) 技术:Ags 和 Abs 相互结合以产生许多 C3 分子。这种放大原理用于补体 IIF,它比 IIF 更敏感。

  双免疫荧光技术:该技术允许识别细胞上两种不同抗原的存在,或通过用不同荧光团(例如 FITC 或罗丹明)标记的两种抗体识别组织中的特定细胞。双重染色可用作直接/间接方法。间接法具有很高的灵敏度。

  内分泌腺自身免疫性疾病的历史特征

  对内分泌腺自身免疫性质的早期描述可以追溯到 1855 年,当时 Addison [ 7 ] 描述了一个由于肾上腺特发性(淋巴细胞)浸润而导致肾上腺功能不全的病例。到 1912 年,当 Hashimoto [ 8 ] 描述了患者甲状腺肿大的单核白细胞浸润,将其定义为“淋巴瘤性甲状腺肿”,到 1940 年,当 Von Mayerburg [ 9 ] 描述了患者的胰岛淋巴细胞浸润(胰岛炎)患有 1 型糖尿病。1956 年,报告了三项重要发现,从而开启了自身免疫性疾病时代:(a) 慢性甲状腺炎中针对甲状腺球蛋白的自身抗体的证明 [ 10],(b) 在格雷夫斯病患者中存在刺激甲状腺的药物 [ 11 ] 和 (c) 通过用自体甲状腺组织的匀浆免疫兔子,证明慢性甲状腺炎在兔子中是可重现的 [ 12 ]。1957 年,Witebsky [ 13 ] 建立了定义自身免疫性疾病的标准。

  内分泌性自身免疫性疾病的自然史

  自身免疫性内分泌疾病是一种慢性疾病,其特征是遗传易感性、循环自身抗体的存在和靶器官中的淋巴细胞浸润,这些疾病的自然史分为三个不同的阶段:(a) 潜在的,(b) 亚临床或潜伏期,和 ( c) 临床。自身抗体是涵盖所有三个阶段的循环标志物。根据其诱导或不损伤靶器官的能力,自身抗体可细分为致病性和非致病性。

  自身免疫性内分泌疾病中的自身抗体

  内分泌系统是受自身免疫影响较大的系统之一。

  甲状腺自身免疫性疾病

  甲状腺自身免疫性疾病 (TAD) 总结在表中 3. 它们的特征是存在甲状腺球蛋白自身抗体 (TGAbs) 和甲状腺微粒体自身抗体 (TMAbs)。

  胃自身免疫性疾病

  胃自身免疫性疾病总结于表中 3. 这些疾病的特征是存在壁细胞自身抗体 (PCA)。最初,PCA 通过使用胃匀浆的补体结合试验检测 [ 39 , 40 ],在 62% 的恶性贫血患者和 4% 的正常对照中发现。随后通过 IIF 使用人或动物胃黏膜对其进行检测;使用这种技术,在 86% 的恶性贫血患者和 11% 的对照患者中发现了 PCA [ 40 ]。PCA 是器官,但不是严格意义上的 IgG 类物种特异性自身抗体,与壁细胞的微粒体部分发生反应。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/679.html

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