资讯动态

细胞实验外包:细胞成脂、成骨、成神经诱导实验服务

2021-11-18 10:07:20
|
访问量:113912

  细胞成脂、成骨、成神经诱导实验操作流程:

  成骨诱导培养液配备与诱导操作:

  1、准备含10%FBS的α-MEM培养液;

  2、在备好的α-MEM培养液中添加50μM 抗坏血酸, 10mmβ-磷酸甘油和100nm地塞米松;

  3、准备6孔培养板,将P4细胞按照5×103个/平方厘米的规格接种于原始α-MEM培养液中;

  4、待细胞长至基本融合后,更换上述制备完成的成骨诱导培养液;

  5、每三天换液一次,细胞长至7天时进行碱性磷酸酶染色;

  6、二十八天后再进行矿化结节的茜素红染色。

  素红染色方法介绍:

  1、去除细胞当前使用培养液,使用PBS清洗两次;

  2、使用10%甲醛室温固定15分钟,完成后使用重蒸馏水冲洗两次;

  3、按照1ml/孔加入40mM的茜素红染色液,室温孵育20min并轻微振荡;

  4、清除掉没有完全结合的染料,用重蒸馏水漂洗并振荡5min重复4次;

  5、倾斜放置2min,吸取多余的重蒸馏水;倒置显微镜观察拍照记录。

素红染色

  成脂诱导培养液配备与诱导操作:

  1、配置FBS10%含量的HG-DMEM培养液;

  2、在配制完成的HG-DMEM培养液中加入1μM地塞米松,10μg/ml胰岛素,200μM吲哚美辛和0.5mM IBMX;

  3、准备6孔培养板,将P4细胞按照2×104个/平方厘米的规格接种于原始HG-DMEM培养液中

  4、待细胞长至基本融合后,更换上述制备完成的成脂诱导培养液培养2天,在用只含有10μg/ml胰岛素的成脂维持培养液培养1天,如此交替循环培养至14天,使用红油O染色。

  红油O染色方法介绍:

  1、去除细胞使用的当前培养液,使用PBS清洗两次;

  2、27.5%甲醛室温固定20分钟;

  3、重蒸馏水清洗3此,空气中干燥;

  4、加入0.5%的红油室温孵育一小时;

  5、配制70%乙醇溶液清洗3次;

  6、倒置显微镜观察拍照记录。

  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言(即刻联系为您提供专业的解决方案) ×