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流式细胞仪检测细胞凋亡实验操作步骤(手把手教你做流式细胞仪检测细胞凋亡实验)

2023-04-15 10:38:50
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  流式细胞仪是一种能够让细胞以单细胞液体流形式穿过激光束并对其进行探测和计数的检测装置,同时对细胞有自动分析和分选的作用。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。

  流式细胞仪功能强大,不仅可以分析、鉴定以及分离混合细胞的成分,也可以鉴定一种细胞所处的不同生命活动时期。

  今天小编就给大家分享一下用流式细胞仪检测细胞凋亡的实验。

  实验步骤

  01

  25T培养瓶中PC-3细胞复苏后生长至80%-90%。

  02

  弃上清液,用PBS轻轻洗两次,加入2ml胰酶消化,显微镜下观察,细胞变圆收缩。

  03

  加入2ml完全培养基,吹打均匀,转移到15ml离心管,1000转离心5分钟,小心吸除上清。

  04

  用1x结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1-5×10^6/ml细胞。

  05

  取100µl的细胞悬液于5ml流式管中,加入5µlAnnexinV/FITC混匀后于室温避光孵育5分钟。

  06

  加入5µl的碘化丙锭溶液(PI),并加400µlPBS,立刻进行流式或荧光显微镜检测。

  07

  流式细胞仪检测,保存数据。

  08

  取100µl的细胞悬液于5ml流式管中,加入5µlAnnexinV/FITC混匀后于室温避光孵育5分钟。

  09

  结束。

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