细胞纯化是指从混杂的细胞样本中分离和提取特定的细胞类型的过程。常见的细胞纯化方法包括离心纯化、除杂、离心选择性沉淀和流式细胞术。离心纯化是一种常用的细胞纯化方法，它通过对细胞悬浮液进行离心来分离不同类型的细胞。除杂是另一种常用的细胞纯化方法，它通过吸附或化学反应将杂质物从细胞悬浮液中分离出来。离心选择性沉淀是一种特殊的离心纯化方法，它通过在离心过程中添加选择性试剂来选择性地沉淀某些特定类型的细胞。流式细胞术是一种高精度的细胞分选技术，它通过将细胞悬浮液通过细孔流动并施加压力来分离和提取特定类型的细胞。总之，细胞纯化方法是细胞分离和提取的重要技术，它为细胞生物学研究和临床应用提供了基础。

　　细胞的纯化一般分为自然纯化和人工纯化两大类。可根据不同细胞种类、来源、实验要求和目的而选择不同的纯化方法。下面主要介绍一些基本的方法。

　　一、自然纯化

　　自然纯化即利用某一种类细胞的增殖优势，排挤其他细胞生长，靠自然的增殖潜力最后留下生长优势细胞，去除其他细胞，达到细胞纯化的目的。但这种方法常无法人为的选择细胞，时间长，多数情况下，剩下的都是成纤维细胞，因此，仅有些恶性肿瘤细胞可以通过此方法，自然纯化而建立细胞系。

　　二、人工纯化

　　利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件，抑制其他细胞的生长，从而达到纯化细胞的目的。

　　1. 酶消化法

　　①概述：由于上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，成纤维细胞对胰蛋白酶比较敏感，而上皮细胞对胰蛋白酶的耐受性较高，因此，在消化培养细胞时，成纤维细胞先脱壁，而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁，特别是原代培养和培养早期,这种差异尤为明显，因而可以利用这种差异采用多次差别消化方法，将上皮细胞和成纤维细胞分开达到纯化细胞的目的。

　　②方法：采用普通消化传代方法，将0.25%胰蛋白酶注入培养瓶内两次，每次加1 mL（25 mL培养瓶），稍加摇动让胰蛋白酶流过所有细胞表面，然后倒掉。盖好瓶盖，将培养瓶放在倒置显微镜下观察，发现纤维样细胞变圆，部分脱壁，立即加入2mL有血清培养液，终止消化。用弯头吸管轻轻吹打纤维样细胞生长的区域（可事先在显微镜下用记号笔在培养瓶上画出记号）。吹打过程中不要用力，也不要吹上皮细胞生长区域。吹打结束后，再用少量培养液漂洗一遍，然后加入适量培养液继续培养，也可重复上述操作再进行一次，或隔几日后或下次传代时，再进行上述操作。经过几次处理可以将成纤维细胞去除或将两者分开。

　　2.机械划除法

　　（1）概述：原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞多数都同时出现，混杂生长。这种混杂生长常常分区呈片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。因此可以采用机械的方法去除不需要的细胞的区域，而保留需要的。

　　（2）方法：将要纯化细胞的培养瓶，放在倒置显微镜监视下进行。用弯头滴管在不需要生长的细胞区域推划，使细胞脱壁悬浮在培养液中，注意不要伤及所需细胞；推划后用培养液冲洗两次，即可加培养液继续培养；数日后如发现不需要的细胞又长出，可再进行上述操作，这样反复多次可以纯化细胞。操作过程要严格无菌操作，防止污染。

　　3.反复贴壁法

　　（1）概述：成纤维细胞与上皮细胞相比，其贴壁过程快，大部分细胞常能在10~30 min完成附着过程（但不一定完全伸展）；而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起。利用不同细胞贴壁速度不同的特点，经过反复贴壁，可以将早期传代培养中的成纤维细胞和上皮细胞分开。

　　（2）方法：将细胞悬液接种到一个培养瓶内（最好用无血清培养，因为在无血清支持下，上皮细胞贴壁更慢）静置20 min；在显微镜下观察，见细胞部分贴壁，稍加摇荡也不浮起时，将培养液连同尚未贴壁细胞一起倒出或吸到另一培养瓶；继续培养或重复上述操作，将上皮细胞和成纤维细胞逐步分隔开。

　　4.克隆法

　　在同一细胞系中，存在不同的细胞株，它们的功能和生长特点仅略有不同，要纯化出某一种细胞，用上述方法常不能将同一细胞系的不同株分开，可采用细胞克隆的方法。

　　具体过程是采用细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，然后对每一克隆进行测试，选择出所需要的克隆。

　　5.培养基限定方法

　　某些细胞在生长过程中必须存在或去除某种物质，否则将无法生长，而其他细胞与之相反。可以利用这种技术来纯化细胞。如杂交瘤技术中常用的HAT培养液，就用来筛选杂交瘤细胞而抑制其他细胞。

　　6.流式细胞仪分离法

　　流式细胞仪可根据细胞核酸含量、某些物质含量或细胞结构大小等参数来将细胞分离成不同的群体。