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实验外包:免疫组化步骤分享

发布时间:2021-08-19 03:22:14 阅读:14372次 来源:本站

  想法高分文章,但是不会免疫组化怎么办?今天就先为大家介绍免疫组化步骤(石蜡切片)。

  实验步骤:

  1. 在60℃烤箱烤片30-60min,这一步是为了使蜡片水分蒸发和石蜡融化,好让组织切片牢固贴在玻片上。做切片是免疫组化的前提,当然要注意薄厚均匀、切片完整、无褶无刀痕等,这些比较考验刀工;

  2. 脱蜡水化,依此放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10min,乙醇梯度(高至低)各2min,水。然后用自来水洗一下,但不要直接对着切片冲洗;

  3. 抗原修复,这个我一般选高压热修复,ph6.0柠檬酸缓冲液,一定要全部浸泡切片,等高压锅冒气后5min结束,自然冷却,温度骤降可能引起脱片哦。3%H2O2避光浸泡15min;

  4. 使用免疫组化油笔围绕组织画圈,然后PBS洗5min×3次,这个时候就会发现PBS被锁在画的圈中,不会流干,保证不会干片;

  5. 滴加5%BSA(BSA用PBS溶)稀释的一抗,每个组织约20μl,用200μl的枪头尖端抹平,4℃过夜或者37℃1-2h;

  6. 滴加二抗,一滴每个,用200μl的枪头抹平,室温静止30min;

  7. 再次PBS洗5min×3次;

  8. DAB-H2O2显色10min。(B:C=1:50,25μl每个,现配现用)在这时要观察,如果染色明显,不到10min即可蒸馏水洗终止显色,但是一般超过20min都不会有什么好结果;

  9. Mayer苏木素染色30s,水洗,盐酸酒精分化3s,流水浸15min;

  10. 脱水,乙酸2min,乙醇梯度(低至高)各2min,二甲苯5min;

  11. 中性树胶封片。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/172.html

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