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细胞传代培养操作步骤

2022-06-20 10:30:22
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  根据不同细胞采取不同的培养细胞传代方法。悬浮生长的细胞可以用直接吹打或离心分离后传代,或自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。贴壁生长的细胞用消化法传代,部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代。

  细胞传代培养时常用的酶为胰蛋白酶,它可以破坏细胞与细胞、细胞与培养瓶之间的细胞连接或接触,从而使它们之间的连接减弱或完全消失。经胰蛋白酶处理后的贴壁细胞在外力(如吹打)的作用下可以分散成单个细胞,再经稀释和接种后就可以为细胞生长提供足够的营养和空间,达到细胞传代培养的目的。

  01

  贴壁细胞的消化法传代

  ①

  吸除或倒掉瓶内旧培养液。

  ②

  向瓶内加入3-5ml PBS,轻轻摇动培养瓶,使PBS流过所有细胞表面,然后吸掉或倒掉PBS后再加1~2 mL新的消化液进行消化。

  ③

  最好在37℃或25 ℃以上室温环境下进行消化。消化2~5 min后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现细胞质回缩、细胞间隙增大后,应立即终止消化。

  ④

  加完全培养基3-5ml,终止消化。

  ⑤

  用弯头吸管,吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,吹打过程要顺序进行,从培养瓶底部一边开始到另一边结束,以确保所有底部都被吹到。吹打时动作要轻柔不要用力过猛,同时尽可能不要出现泡沫,这些都会对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。

  ⑥

  计数,分别接种在新的培养瓶内。

  02

  悬浮细胞的传代

  因悬浮生长细胞不贴壁,故传代时不必采用酶消化方法,而可直接传代或离心收集细胞后传代。直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成细胞悬液后,再传代。悬浮细胞常采用离心方法传代,即将细胞连同培养液一并转移到离心管内,800~1 000 r/min离心5 min,去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打形成细胞悬液,然后传代接种。

  03

  半悬浮细胞的传代

  半悬浮细胞部分呈现贴壁生长现象,可不经消化处理直接吹打使细胞从瓶壁上脱落下来,而进行传代。但这种方法仅限于部分贴壁不牢的细胞,如SP2/0细胞等。直接吹打对细胞损伤较大,细胞也常有大量丢失,因而绝大部分贴壁生长的细胞均需消化后,才能吹打传代。

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