细胞培养是细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究的基础实验技术之一。通过细胞培养可以直接观察活细胞的形态结构和生命活动，联合各种技术进行各种物理、化学生物的研究。

简述细胞培养一般步骤

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5. 3天换一次培养基。

　　二、 传代

　　1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培养基吸掉。

　　3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃  30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。 冻存液的配制： 70%的培养基+20%FBS+10%DMSO.  DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

细胞培养的注意事项

　　首先是准备各种溶液。

　　第一是配制溶液过程中要用到的水。水用纯水，高压灭菌之后，再去内毒素。去内毒素方法很多，最简单可以放在烘箱180度3小时。或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。

　　第二，各种溶液灭菌：抗生素用去内毒素水配制后，直接过滤除菌（过0.22u滤头）。可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。

　　现在用的培养液，如果是商业化液体培养基，不用处理。如果是粉末，需要用去内毒素水在生物安全柜（或超净工作台）进行配制，再过滤除菌。可以先配浓缩液（如10×），过滤除菌后。再用灭菌去内毒素水稀释成1×培养液。

　　第三，完全培养液的配制：培养液加上合适比例的血清即可。但血清一般保存于－20℃，一般解冻是放在4℃冰箱解冻，耗时长，而且必须解决完全之后，才能进行完全培养基的配制。

　　所以要提前几个小时就将血清从－20℃转入4℃，以期完全解冻。当然如果这一次就需要用完的话（是指用这些血清配制的培养液都用完），也可以放到37℃解冻。

　　第四，最重要的是保证过程中无菌。液体必须要分装。无论过程中用到的培养液、胰酶、血清、PBS、生理盐水、抗生素尽量分装。分装是为了防止污染。如果操作有误，仅能威胁到其中一支，而非整个。培养液、血清、PBS、生理盐水分装为20mL、50mL或100mL/管。胰酶、抗生素可分装为1mL/管。分装最好先于细胞操作

　　第五，操作之前，培养液先放到37度的细胞培养箱里复温。原因：尽量减少对细胞的刺激。低温对于细胞也是一个刺激因素。

　　第六，操作之前，大脑先过一遍此次操作所需要用到的所有用具。将所有用具先放到无菌台面上。减少拿入拿出的动作，保证无菌。（如果万一发现少拿了什么，也不要紧，再加上就是。如果是枪头盒、移液管等用具，最好先用消毒酒精喷一下）。

　　第七，操作之前，带着的手套先喷消毒酒精。然后再进入工作台。等一分钟，等手套上的酒精挥发之后再进行操作。