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MKN-7细胞培养如何避坑,MKN-7(人胃癌细胞)培养攻略

发布时间:2022-05-16 10:21:26 阅读:11642次 来源:普诺赛

  MKN-7细胞基础信息

  01 细胞培养条件

  RPMI-1640 (PM150110)+10% FBS (164210-500)+1% P/S (PB180120)

  02 生长特性

  上皮样,贴壁细胞

  03 传代方式

  用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化7~10min,推荐传代比例1: 2

  冻存和复苏

  冻存

  建议冻存密度比普通细胞略高。如期望复苏后可以铺满6cm的培养皿,则需冻存的细胞量为培养皿铺满时的1.5倍。

  请使用优质冻存液。如果是自己配置的程序冻存液,可以适当提高血清含量。推荐冻存密度1~5×10^6 cell/mL。

  复苏

  建议使用T25瓶或者6cm的培养皿进行培养。如果复苏前期细胞形态多样,可进行暂时换液处理,待细胞铺满再传代;如需扩增,需等细胞较密集时再传代。

MKN-7细胞培养如何避坑,MKN-7(人胃癌细胞)培养攻略

MKN-7生长图片

  MKN-7细胞培养注意事项

  1 MKN-7生长速度很慢

  倍增时间约3天左右,正常培养5~7天可传代一次;

  2 贴壁形态展开较大

  消化之后一瓶细胞量比较少,传代时的比例建议1:2,冻存时1瓶细胞只能冻一管;

  3 折光度较低

  在显微镜下观察时,轮廓有时不清晰,观察时显微镜亮度请勿太高,否则可能看不到细胞边界;

  4 较难消化

  常规的消化方法难以把控,加入培养基后细胞会迅速贴壁。建议使用浸泡消化,使用胰酶完全浸润细胞,直接放入37℃ 的环境中进行消化,消化时间一般在7~10分钟。

  待部分细胞脱壁漂起后,镜下观察,大部分细胞有脱壁迹象后加入适量胰酶,轻轻吹打,将细胞吹落、吹散,随后吸出器皿,加入培养基终止消化,离心收集。

  若还有少量细胞无法轻轻吹下,则在吸出脱落细胞后,加入胰酶继续消化再收集。

  小贴士:使用这种消化方法,可能会造成一定的细胞损失。


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