您的位置:首页>>公司动态>>行业资讯

精准医疗:怎么选择基因敲除动物模型制备技术?

发布时间:2021-09-06 03:56:01 阅读:14832次 来源:本站

  1、传统ES打靶基因敲除——成熟、修饰准确、效果稳定,但制作周期长达一年

  基于胚胎干细胞(ES)的同源重组技术俗称“传统的基因打靶技术”。因具有技术成熟、修饰准确、效果稳定等优点而受到众多科学家一致好评,此外,世 界上所有重要的的基因敲除小鼠模型均通过此技术制备。尽管新兴核酸酶修饰技术如ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等相继出现,但基于ES细胞的 同源重组技术依然是可以满足基因组修饰要求的技术。

  基因打靶就是通过同源重组技术将外源基因定点整合进靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。基因打靶技术目前已 被广泛认为是一种理想的特定修饰与改造生物体遗传物质的较佳方法,其中包括了多种不同的基因敲除和敲入系统,特别是条件性和诱导性基因打靶系统的建立,使 得对基因在时间和空间上的靶位修饰更加明确、效果更加精确可靠。但其存在周期长的缺陷,通常制作周期10-12个月。

  2、TALEN基因敲除——周期短,但存在马赛克现象和脱靶现象

  TALEN技术是一种新的分子生物学工具。科学家发现,来自一种植物细菌的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关 系。利用TAL的序列模块,可组装成特异结合任意DNA序列的模块化蛋白,从而达到靶向操作内源性基因的目的,它克服了ZFN方法不能识别任意目标基因序 列,以及识别序列经常受上下游序列影响等问题,且具有ZFN相等或更好的灵活性,使基因操作变得更加简单方便。但因为脱靶的问题,利用TALEN技术进行 小鼠的基因修饰仍然无法取代传统技术。加上存在马赛克现象,所以在做基因敲入(KI)和其他应用时候也必须谨慎的进行检测。

  3、CRISPR/Cas9基因敲除——周期短,但存在马赛克现象和脱靶现象

  CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 是最新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。 CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性 免疫防御机制。在这一系统中,crRNA(CRISPR-derived RNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans- activating RNA)结合形成双链RNA,此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链 DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑,目前已经成功应用于大小鼠基因的 KO/KI模型制备,其原理也是对目的片段产生特异的切割后,修复过程中产生移码突变或者是片段缺失,或者是在切开位置产生片段插入等现象。

  4、 TetraOne基因敲除——成熟、修饰准确、效果稳定,制作周期只需6个月

  TetraOne基因敲除是业界推出的新技术,沿用ES细胞同源重组的技术体系,采用独特的建系和基因改造技术建立了具有遗传优势的TetraOne ES细胞系,通过胚胎发育前期的显微注射,使TetraOne ES细胞代替内源ES细胞,实现跨越“嵌合体”阶段从而快速获得去Neo杂合子小鼠的基因打靶专利技术。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/277.html

注释:[本文仅供阅读]不代表企业及作者的立场,如侵权请联系删除,欢迎分享本文,转载请保留出处!

推荐服务

  • 分子实验

    分子实验平台为广大科研工作提供蛋白、RNA和DNA分子类分析及检测服务···

  • 细胞实验

    细胞实验平台为广大科研工作者提供原代细胞提取、鉴定和培养相关服务···

  • 病理实验

    动物实验平台为广大科研工作者提供动物寄养、疾病模型构建和体内验证···

  • 动物实验

    动物实验平台为广大科研工作者提供科研成果向产品转化的服务,转化方···

  • 精准医疗

    精准医疗平台为癌症患者提供肿瘤移植动物体内服务,模拟患者癌症发展···