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细胞划痕实验技巧与注意事项

2023-06-29 10:33:31
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  细胞迁移——机体正常细胞的功能之一,与伤口愈合、胚胎发育、血管组织再生等各种发育进程都息息相关。科学家们致力于细胞迁移的研究用以阻止癌症转移等医学应用。其中用到的基本技术就是细胞划痕实验。

  细胞划痕实验是检测细胞迁移运动中一种性价比较高的体外研究方法。其基本原理:当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,这个区域称之为“划痕”,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。这种过程类似体外伤口愈合过程,因此又称之为伤口愈合实验,可以用来观察外源性因素对细胞迁移运动的影响,如药物、响应刺激、基因等。

  优点

  (1)体外划痕实验一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程;

  (2)特别适合细胞与ECM、细胞与细胞之间相互作用引起的迁移作用;

  (3)是细胞迁移的体外实验中最简单的技术,配合活细胞显微成像可以用于分析细胞间的相互作用。

  那么制作划痕实验需要提前注意或了解什么呢?下面总结一些注意事项,避免大家踩雷!

  (1)细胞的选取

  通常永生化的细胞系和原代细胞常用作这方面的模型,如角质形成细胞和成纤维细胞。避免选取生长特别缓慢的、贴壁十分不牢固的或者堆积生长的细胞。

  (2)细胞培养密度

  根据细胞类型选择合适的细胞密度,细胞铺满孔底时划痕效果相对最好,建议是100%的铺满。

  (3)细胞培养方式

  细胞培养方式一定要改成无血清或者低血清的培养基。细胞划痕实验意指细胞迁移而不是细胞增殖,因此需要将细胞增殖的影响降到最低。当然,一定程度上无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但由于细胞内信号传递的负面影响,细胞迁移的速度也会慢很多。培养环境要求37 ℃ 5% CO2的培养箱,选取合适的时间点取样拍照。

  (4)细胞孔板选择

  毫无疑问,6孔板是最好的选择,用枪头划线时尽量垂直,一个孔可以画6条线。划线完成之后记得用PBS洗两次去除划下的细胞。

  (5)统计方法

  使用Image J软件统计划痕面积随时间的变化率以及伤口愈合百分比即可。

  作为细胞迁移能力研究中的重要基础实验,其中涉及很多必不可少的实验考量和实验步骤,提前注意也是十分重要的。以上就是为大家整理的划痕实验小技巧和注意事项,希望可以对大家的实验有一定的帮助呀~

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