在细胞培养中，培养基是十分重要的组成部分。它提供了细胞生长所需的营养物和环境。然而，随着时间的推移，培养基中的某些成分会耗尽、降解或污染，这会影响细胞的正常生长和繁殖。因此，定期更换培养基是必要的，以确保细胞健康和实验结果的正确性。

　　下面将详细介绍何时需要更换培养基的原因、频率和步骤。

　　培养基变质的原因

　　营养物耗尽：细胞需要多种营养物质才能生长和繁殖。当培养基中的某些物质被耗尽时，细胞无法获得所需的营养，从而停止生长。

　　酸碱度变化：培养基的pH值对细胞生长非常重要。如果pH值变化太大，就会影响细胞的代谢和生理功能，甚至导致细胞死亡。

　　氧气含量不足：细胞需要氧气才能进行呼吸作用和能量代谢。当培养基中的氧气含量不足时，细胞会出现缺氧现象。

　　细菌和真菌污染：由于实验室环境的不洁或人为因素，细菌和真菌可能会污染培养基。这些污染物会竞争营养物，释放有害物质，破坏细胞的结构和功能。

　　病毒污染：如果使用的培养基来源不清晰或储存方式不当，就可能存在病毒污染的风险。病毒会感染细胞，导致细胞死亡或不正常的生长状态。

　　更换培养基的频率

　　更换培养基的频率取决于多个因素，例如细胞类型、培养条件和实验目的等。一般来说，初级细胞需要更频繁的培养和更换培养基，而稳定的细胞株则可以较长时间内不更换培养基。

　　以下是一些常见的更换培养基的指南：

　　培养至80%密度：当细胞生长到80%的密度时，就需要更换培养基。这可以避免细胞因过度生长而失去特定功能和性状。

　　每两到三天更换一次：对于快速增殖的细胞类型（如HEK293），每隔两到三天就需要更换培养基。

　　每周更换一次：对于稳定的细胞株（如MCF-7），每周更换培养基即可满足需求。

　　更换培养基的步骤

　　以下是更换培养基的常规步骤：

　　1.准备新鲜的培养基：根据实验需求配制新鲜的培养基，并确保其温度、pH值和氧气含量等参数符合要求。

　　2. 把旧培养基吸出：使用吸管或吸头把旧的培养基吸出，避免对细胞造成伤害。

　　3. 洗涤细胞：将细胞用PBS或缓冲盐水洗涤一至两次，以去除残留的旧培养基和代谢产物。

　　4. 加入新培养基：加入新鲜的培养基至培养器中，注意不要过度摇晃或振动，以避免对细胞造成伤害。

　　5. 继续培养：将培养器放回细胞培养箱中继续培养。

　　总结

　　更换培养基是细胞培养中必不可少的步骤。当培养基中的某些成分耗尽、降解或污染时，都需要及时更换培养基以保证细胞生长和实验结果的准确性。同时，更换培养基的频率应根据细胞类型、培养条件和实验目的等因素进行调整，以确保细胞健康和稳定生长。