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细胞培养何时须更换培养基 (需要更换培养基的原因、频率和步骤)

2023-06-16 10:35:25
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  在细胞培养中,培养基是十分重要的组成部分。它提供了细胞生长所需的营养物和环境。然而,随着时间的推移,培养基中的某些成分会耗尽、降解或污染,这会影响细胞的正常生长和繁殖。因此,定期更换培养基是必要的,以确保细胞健康和实验结果的正确性。

  下面将详细介绍何时需要更换培养基的原因、频率和步骤。

  培养基变质的原因

  营养物耗尽:细胞需要多种营养物质才能生长和繁殖。当培养基中的某些物质被耗尽时,细胞无法获得所需的营养,从而停止生长。

  酸碱度变化:培养基的pH值对细胞生长非常重要。如果pH值变化太大,就会影响细胞的代谢和生理功能,甚至导致细胞死亡。

  氧气含量不足:细胞需要氧气才能进行呼吸作用和能量代谢。当培养基中的氧气含量不足时,细胞会出现缺氧现象。

  细菌和真菌污染:由于实验室环境的不洁或人为因素,细菌和真菌可能会污染培养基。这些污染物会竞争营养物,释放有害物质,破坏细胞的结构和功能。

  病毒污染:如果使用的培养基来源不清晰或储存方式不当,就可能存在病毒污染的风险。病毒会感染细胞,导致细胞死亡或不正常的生长状态。

  更换培养基的频率

  更换培养基的频率取决于多个因素,例如细胞类型、培养条件和实验目的等。一般来说,初级细胞需要更频繁的培养和更换培养基,而稳定的细胞株则可以较长时间内不更换培养基。

  以下是一些常见的更换培养基的指南:

  培养至80%密度:当细胞生长到80%的密度时,就需要更换培养基。这可以避免细胞因过度生长而失去特定功能和性状。

  每两到三天更换一次:对于快速增殖的细胞类型(如HEK293),每隔两到三天就需要更换培养基。

  每周更换一次:对于稳定的细胞株(如MCF-7),每周更换培养基即可满足需求。

  更换培养基的步骤

  以下是更换培养基的常规步骤:

  1.准备新鲜的培养基:根据实验需求配制新鲜的培养基,并确保其温度、pH值和氧气含量等参数符合要求。

  2. 把旧培养基吸出:使用吸管或吸头把旧的培养基吸出,避免对细胞造成伤害。

  3. 洗涤细胞:将细胞用PBS或缓冲盐水洗涤一至两次,以去除残留的旧培养基和代谢产物。

  4. 加入新培养基:加入新鲜的培养基至培养器中,注意不要过度摇晃或振动,以避免对细胞造成伤害。

  5. 继续培养:将培养器放回细胞培养箱中继续培养。

  总结

  更换培养基是细胞培养中必不可少的步骤。当培养基中的某些成分耗尽、降解或污染时,都需要及时更换培养基以保证细胞生长和实验结果的准确性。同时,更换培养基的频率应根据细胞类型、培养条件和实验目的等因素进行调整,以确保细胞健康和稳定生长。

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