细胞冻存的详细操作步骤

2023-06-14 10:29:31

访问量：12852

　　细胞冻存是将活细胞保存在极低温度下，以便后续使用的一种方法。以下是细胞冻存的详细操作步骤：

　　1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；

　　2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

　　3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；

　　4. 离心1000rpm，5min；

　　5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；

　　6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；

　　7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；

　　8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。