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细胞冻存的详细操作步骤

2023-06-14 10:29:31
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  细胞冻存是将活细胞保存在极低温度下,以便后续使用的一种方法。以下是细胞冻存的详细操作步骤:

  1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;

  2. 取对数生长期的细胞,去除旧培养液,用PBS清洗。

  3. 去除PBS,加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面)把单层生长的细胞消化下来;

  4. 离心1000rpm,5min;

  5. 去除胰蛋白酶,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;

  6. 将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml;

  7. 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;

  8. 冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

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