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动物细胞培养实验中需要注意哪些基本要求

2023-05-25 10:36:35
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  细胞培养技术已经成为当生命科学各域的基础技术和基本技能,它也是细胞工程、基因工程和生物医学工程的重要研究手段。那我们在实际的动物细胞培养实验中需要注意哪些基本要求呢?

  1、实验准备

  实验必须分门别类地制订操作卡片,如清洗卡、消毒卡、细胞常用液(细胞培养液、BSS液、消化液)配制卡、牛血清检测分装卡、细胞原代和传代操作卡等。各卡片上注明实验所需器材的名称、规格、数量、操作要和实验注意事项等。实验应按卡片收集、清点所需用品,一并放入超净台内,这样可避免操作时因物品不全而往返拿取所浩成的污染。同时,根据每个实验的要求,准备好瓶管支架器械消毒盒等。实验器材准数要大于实验使用数,瓶盖数要大于瓶数。这样才能有条不紊地做实验,也减少了忙乱操作所引起的污染。

  2、无菌室和操作室消毒

  无菌室内每周用乳酸蒸气(或过氧乙酸)加紫外线消毒1~2次。实验,将实验器材放入超净台内,打开超净台紫外线灯,同时启动超净台风机,40 min后消毒完毕,关闭紫外线灯。这样,超净台内空气被净化,超净台面构成相对无菌的环境。

  3、无菌操作要求

  ①手指不能触及器材使用端。如触及,器材需更换或烧灼后再使用(如瓶口)。

  ②减少手与器材的接触面,学会手指操作。

  ③一切操作,如打开或封闭瓶口,安装吸管、注射器等,都要在火焰方进行。瓶口、吸管、注射器使用要经过火焰消毒后使用。

  ④瓶口顺风斜放在支架上。试剂用后立即封闭瓶口。瓶口长时间敞开会增加落菌的机会。

  ⑤不同的细胞同时操作时,要管用,并要勤换吸管,防止扩大污染和交叉污染。

  ⑥瓶口液滴不能倒回瓶内。液滴用干酒精棉球擦拭,瓶口再经火焰消毒。

  ⑦操作者动作要准确敏捷,尽量避免空气流动。

  4、实验中操作要求

  洗手、着装与外科临床要求相同。双手用肥皂洗净后浸泡于消毒液中,并用75%的酒精擦拭。细胞培养用液从冰箱取出,试剂瓶口和外壁经洒精外布擦洗后人超净台,超净台面要用酒精纱布擦拭。超净台上的物品面布局合理,污染废液缸、酒精棉球缸在右侧位,酒精灯在中央位,试剂瓶在左侧位。拆除大包装,点燃洒精灯(95%洒精)、火焰无色或微黄色表示酒精杂质少,酒精燃烧完,全(不能使用废酒精或工业酒精,这类酒精燃烧时产生的化学物质易附着到吸管或其他瓶、皿上,带入培养液中会伤害细胞)。

  浸泡75%酒精中的金属器械用台面消毒镊子取出,经无菌干纱布擦拭后,迅速通过火焰(器械不能在火焰中灼烧过长时间),冷却后使用,避免烫伤细胞。细胞培养液、牛血清、酶液的吸管,使用后不能再用火焰消毒,因为吸管中残留的培养液被烧焦碳化,再使用时,会把有害碳化物带入培养液中毒害细胞。操作中手指被污染时,可用酒精纱布或棉球擦拭。在实验过程中,不要面向操作台讲话或咳嗽,避免将唾沫中微生物带入超净台内,污染空气。实验者离开超净台时,立即用肘关节关闭侧窗口,避免无菌室内细菌随空气流入净化操作区。

  5、实验后要求

  实验完毕,关闭超净台风机和电源,未使用过的器材放入饭盒内,用过的玻璃器材投入清水中浸泡,包装纸叠卷,绳成束分类归人,,后,超净台面用酒精纱布或棉球擦拭,紫外线消毒。

  6、注意事项

  无菌操作离不开火和酒精,操作中避免事故发生。要用打火机点火。火柴点火时,火星熄灭后投入废缸内(缸内有废酒精棉球)。酒精溅出台面或瓶外壁时,立即擦干;一旦发生着火事故,立即关闭超净台风机,用饭盒、湿布扑灭火焰。


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